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蛋白晶体没有衍射怎么办?

蛋白长出晶体后,有时候会发现没有衍射,可能的原因及应对方法如下:a. 可能蛋白结构高度灵活,因此结构不均一。可以尝试筛选配体、添加剂、辅因子和其他小分子或者大分子能帮助蛋白呈现更加刚性的构象。b. 由于蛋白质发生了酶修饰、部分脱氨、部分氧化或者其他翻译后修饰导致样品的非均一性。从蛋白表达、溶解、纯化一直到结晶来分析哪些因素可能会导致您的蛋白样品会发生上述修饰。如果您的蛋白是个酶,那么结合上抑制剂或者配体,可以使得酶变得更加刚性和构象均一。尽量减少从蛋白表达到蛋白结晶的步骤数。c. 如果晶体在种下...

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常用蛋白酶酶切位点及融合标签去除策略

目前主要通过4种方法移除多肽标签,即化学法、内切蛋白酶法、外切蛋白酶法以及基于内含肽的自我剪切法.化学法最常用的便是溴化氰(CNBr)法,原理是CNBr能断裂甲硫氨酸和下游氨基酸残基之间的肽键(Met-X, X为任意氨基酸)。化学法具有效率高、耗时短、成本低等优点。化学法也有很多不足,例如化学法所需的反应条件容易破坏目标蛋白的结构和功能,而且所使用的溴化氰等试剂具有毒性,不适合药用蛋白的处理及研究。化学法使用的溴化氰能够使蛋白质在甲氨酸残基处断裂,如果目标蛋白含有内源甲氨酸残基,会发生非特异性断...

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自然界首个不需要引物的DNA聚合酶序列

蛋白信息:http://www.uniprot.org/uniprot/M5AAG8 种属来源:Nitratiruptor phage NrS-1氨基酸序列:MIMEIPAIKALSRYAQWVIWKKERDTKIPYNPNNGKKASSTDPLAWGDIDEAQAGLVRYGANGLGFVLTKSDPFVFIDLDHVLDENKRVKCEWARQLLKEIKSYTEISPSGDGLHVVVSGKLPDYIKHKTKFDDGSALEVYESGRYMTITGEVFDGRDDIKELDLSILGEF...

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促溶标签GB1的蛋白序列及DNA编码序列

将外源基因转入大肠杆菌等宿主细胞中表达以获得相应的目的蛋白,是科研以及生产过程中获取所需蛋白质的重要方法之一。大肠杆菌作为蛋白表达的宿主细胞有很多优点:比如易于繁殖,蛋白表达量高且价格便宜。但是它也有很多局限性,例如:一些异源蛋白在大肠杆菌体内表达时表达量很低,一些蛋白表达后易于降解,或者表达的外源蛋白对宿主细胞具有毒性,导致细菌生长停滞或死亡。或者虽然表达量较高,但表达时蛋白尚未正确折叠便聚合在一起形成包涵体。对包涵体进行体外变复性实验使其重新折叠的方法不仅复杂,而且难以保证变复性后蛋白的结构...

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同种型(isotype)、同种异型(allotype)和独特型(idiotype)

在讨论同种型(isotype)、同种异型(allotype)和独特型(idiotype)之前,我们顺带先了解下抗体的其他概念。抗体是一种免疫球蛋白,人的抗体可以分为5类(class),分别是IgA,IgD,IgE, IgG,IgM。而通常所说的IgG1,2,3,4及IgA1和IgA2则是亚类(subclass)根据Ig轻链C区氨基酸组成和排列的不同,可将L链分为κ和λ两型(type)。在λ型轻链C区内氨基酸组成又存在微小差异,由此将λ链分为4个亚型(subtype, λ1-λ4)。不同的抗体的重...

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慢病毒、逆转录病毒及病毒包装(第二代/第三代)

慢病毒是逆转录病毒科下面的一个属,之所以成为慢病毒,是因为这些病毒具有长达数年的潜伏期,其中人HIV,猴SIV,猫FIV都是慢病毒。逆转录病毒至少包含三种基因:gag包含组成病毒中心和结构的蛋白质的基因(Gag, group specific antigen)pol包含逆转录酶的基因(Pol, polymerase)env包含组成病毒外壳的基因(envelope)。逆转录病毒可以分为三类:致瘤病毒(导致癌症);慢病毒(导致慢性病);泡沫病毒(不导致疾病)。Gag形成病毒核心,pol编码各种RNA...

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萤火虫和海肾荧光素酶的区别

萤火虫荧光素酶是从甲虫(Photinus pyralis)中分离得到,分子量为61kDa;而海肾(Renilla)荧光素酶则是从海肾(Renilla reniformis)中分离,分子量为36kDa。这两种酶的区别之一是他们的底物和辅因子不同:萤火虫荧光素酶需要荧光素、氧气、ATP和镁离子同时存在才能发光;而海肾荧光素酶仅需要腔肠素(coelenterazine)和氧气。萤火虫荧光素酶和海肾荧光素酶的区别之二是发光的颜色不同:萤火虫荧光素酶产生的光颜色呈现黄绿色,波长550-570nm;而海肾荧...

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结构生物学简介、应用及方法

结构生物学是一门以分子生物学生物化学和生物物理学的分支,关心的生物大分子(如蛋白质分子和核酸分子)的分子三维结构(Tertiary structure)(包括构架和形态),它们是如何获得它们的结构,并研究改变它们的结构与影响其功能的关系的学科。由于结构生物学能够解释生物大分子的构象和相互作用的方式,而所有的生命活动都是通过各种生物大分子的相互作用来实现;因此,对于生物学家们来说,这是一个非常有吸引力的领域。蛋白质及其复合物三维结构的测定是生物研究最重要的科学基础之一,和结构相关工作共获诺贝尔奖2...

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