纽普生物

基因合成

问: 什么情况下需要做全基因合成?
答: 以下情况可能会用到全基因合成
(1)通过密码子优化,提高外源基因的表达量。
(2)序列已知,但难以获得生物样品的基因。
(3)表达条件苛刻,表达丰度极低的基因。
(4)人工设计的各种基因。
(5)人工设计的核酶。
(6)用于DNA芯片的大量cDNA。
(7)对基因进行各种人工改造。
问: 全基因能合成多长的片段?
答: 理论上没有长度限制。但是由于克隆技术,载体容量等因素存在,一般全基因合成长度不超过10kb。我们可以完成10kb以下的全基因合成。
问: 纽普生物能提供哪些免费的载体?
答: 常见的商业化载体我们基本都有,比如pET系列载体、pEGFP载体、慢病毒包装载体、siRNA载体等。我们也可以接受客户提供的载体进行克隆。
问: 密码子优化有必要吗?
答: 对于用于蛋白表达的基因来说,多数情况下是有必要的。比如真核生物的基因需要在原核生物中表达。由于真核生物的密码子偏好和原核生物有很大不同,对基因进行密码子优化将显著提高表达效率。有客户反馈经过我们优化后的序列比原序列的表达量提高了3-5倍。
问: 全基因合成需要多长时间?
答: 对于500bp以下的片段,平均合成周期是10个工作日。500-1000bp的片段,平均合成周期是12个工作日。更长的片段每增加1kb,平均需要的时间增加7个工作日。
问: 如果我需要亚克隆到其它载体怎么办?
答: 我们可以免费帮您将合成好的全基因连接到您感兴趣的载体(在下订单的时候需要提供相应的载体及载体信息)。我们还可以免费提供多种真核和原核的表达载体,欢迎您联系我们的客服人员查询使用。
问: 全基因合成的步骤是什么?
答: 全基因合成包括:设计合成引物;PCR拼接序列;克隆到载体;测序验证。
问: 我该选择全基因合成还是PCR克隆?
答: PCR克隆需要提取表达基因的组织或细胞的RNA,反转录为cDNA,再从cDNA扩增出目的基因。获得的目的基因不大容易做序列上的修改,任何突变体都必须通过后续的突变步骤得到。密码子优化就更不可能了。PCR克隆的另一个重大局限是对表达丰度低的基因、表达时间极短的基因等特殊基因难以成功克隆。比较而言,全基因合成是一种更加灵活,更容易成功而且价格更便宜的克隆方法。