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Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是一种快速、高效产生重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)的技术(Luckow et al., 1993),利用细菌转座子原理,在大肠杆菌内就能完成重组病毒的构建,取名为Bac-to-Bac表达系统,意即从细菌(bacterium)到杆状病毒(baculovirus),革命性地改变了重组昆虫杆状病毒的构建方法。 其基本原理为:将一个改造后的AcNPV基因组转化入大肠杆菌,使它像普通质粒一样能在细菌中复制(由于太大,只限单拷贝),将其称之为杆状病毒穿梭载体...

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大肠杆菌菌株基因型符号及含义说明【附手册】

野生的大肠杆菌(E.coli)的基因组DNA中有470万个碱基对(bp),内含4288个基因。E.coli基因组中还包含有许多插入序列,如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段,这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的,由此表明了基因组具有它的可塑造性。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造,使其中的某些基因发生突变或缺失,从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化,这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype),把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型(Genotyp...

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噬菌体展示技术系统发展简述

噬菌体展示技术是一种针对单基因操作的体外克隆和重组表达技术, 已经发展成为可以操作多基因(基因簇、基因组)的体外克隆及体内克隆和重组表达的噬菌体展示技术系统, 由经过分子遗传改造后的噬菌体、辅助噬菌体、宿主细菌等组份集成构成。应用该技术将外源多肽(蛋白质)编码序列整合到噬菌体基因组中并以融合蛋白的形式展示在噬菌体表面, 通过亲和筛选开展综合性功能鉴定, 显著特点是形成“基因型与表现型偶联”, 将重组蛋白质筛选与基因筛选合二为一。与酵母双杂交技术相比, 它提高了鉴别未知肽结合位点的能力、效率和敏感...

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双特异性抗体种类、特点及其制备技术

双特异性抗体是一类可以同时特异结合2个不同抗原的双功能的抗体分子。目前,至少有30 多种双特异性抗体药物处于临床研究阶段。双特异性抗体在自然状态下不存在,只能通过人工制备,经过多年的研究及技术发展,双特异性抗体在结构上出现了许多不同的设计策略。按照其是否含有Fc 功能区,主要分为2 类: 含有Fc 区的双特异性抗体和不含Fc 区的双特异性抗体。1.1    含有Fc 区的双特异性抗体抗体的Fc结构域的生物学功能有:抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用(ADCC)和补体介导...

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噬菌体

噬菌体(英语:bacteriophage或者phage)是病毒的一种,其特别之处是专以细菌为宿主,较为熟知的噬菌体是以大肠杆菌为寄主的T2噬菌体。跟别的病毒一样,噬菌体只是一团由蛋白质外壳包裹的遗传物质,大部分噬菌体还长有“尾巴”,用来将遗传物质注入宿主体内。超过95%已知的噬菌体以双螺旋结构的DNA为遗传物质,长度由5,000个碱基对到5,000,000个碱基对不等;余下的5%以RNA为遗传物质。噬菌体的基因组有单链DNA、双链DNA和RNA这三种类型;有线性、环状两种形式。噬菌体是一种普遍存...

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抗体特异性验证策略

在一项新的研究中,国际抗体验证工作小组(International Working Group on Antibody Validation, IWGAV),即一个由在蛋白生物学领域有着不同研究兴趣的国际科学家组成的独立小组于2016年9月5日宣布在Nature Methods期刊上在线公布了他们开发出的初步策略来解决抗体特异性、功能性和可重复性方面至关重要的未被满足的需求。IWGAV旨在为抗体制造者和使用者进行抗体验证而提出策略建议。尽管抗体在科学研究中是最为频繁使用的工具之一,但是还没有一种...

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Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统原理说明

Bac-to-Bac昆虫杆状病毒表达系统可以快速、高效的制备重组杆状病毒,该系统依赖一个位点特异性的转座将一个完整的表达元件重组到杆状病毒的穿梭质粒上(bacmid)。该系统主要包含以下几个部分:pFastBac载体:包含杆状病毒特异的启动子,在其下游插入目的基因后形成一个完整的表达元件。这个表达元件届时会以转座子的形式插入到穿梭质粒上。DH10Bac菌株:包含一个杆状病毒穿梭质粒(bacmid),一个辅助质粒。辅助质粒表达转座酶,帮助完成转座过程。DH10Bac的基因型为:F– mcrA Δ(...

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常用测序通用引物大全

下面是我们从网上搜集的最全的常用测序通用引物列表:测序通用引物列表引物名称序列(5'→3')描述3'AOX1GCAAATGGCATTCTGACATCCFor Pichia vectors with AOX1 terminator, reverse primer5'AOX1GACTGGTTCCAATTGACAAGCFor Pichia vectors with AOX1 promoter, forward primerPolyhedrin forwardAAATGA...

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Pubmedy:显示影响因子+引用数、Sci-hub全文下载的浏览器扩展

好久没有更新博文了,今天就正式的来一发。这一发主要内容是一款浏览器扩展的介绍,名字叫Pubmedy。Pubmedy是我写的第一个浏览器扩展,功能主要有在Pubmed上显示杂志的影响因子和文章引用数,显示Sci-hub全文下载链接和一键生成AMA格式的引用。一.杂志的影响因子,文章引用数等这些数据显示在哪里?杂志的影响因子,文章引用数, Sci-hub全文下载链接和一键生成AMA格式引用的按钮主要显示在Pubmed上的两个地方。一个是Pubmed的搜索结果页面:另外就是文章摘要显示页面,如下图:二...

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目前常用的蛋白共表达策略

目前常用的蛋白共表达策略有:1. 多启动子表达载体在同一个载体中插入多个独立的转录单元,每个转录单元有自己的启动子和ORF。缺点是基因表达水平不平衡,在某些细胞系中。启动子之间产生干扰,甚至发生基因重排,而且转录单元数有限制。2. 剪切载体利用同一个启动子,形成一个完整的转录本;初级转录本在剪切信号处断裂形成独立的次级mRNA,分别翻译成不同的蛋白。缺点是剪切信号机制不清楚,很难控制,该方法不常用。3. 融合蛋白将多个蛋白顺序连接,在同一个启动子的转录下,形成一个完整的转录本。翻译成一个融合蛋白...

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