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细胞因子生物学活性检测实验-干扰素生物学活性检测

干扰素能刺激某些指示细胞(如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以 及人胚肌皮或肺单层细胞)产生抗病毒蛋白,从而使细胞免受水疱性口炎病毒(VSV) 的攻击,根据待测样品不同稀释度的保护能力,计算出干扰素生物学活性单位。 1.  96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN, 每个稀释度设3 孔,每孔50 μl,病毒对照不加IFN 2. ...

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细胞因子生物学活性检测实验-肿瘤坏死因子-α生物学活性检测

TNF-α受体广泛地分布于多种肿瘤细胞和血细胞,根据TNF-α与相应靶细胞结 合后引起不同的生物学效应,建立了多种检测TNF-α生物学活性方法。某些肿瘤细 胞膜表面的TNF-α受体与TNF-α结合后,可导致这些肿瘤细胞的死亡,可通过检测 对肿瘤细胞的杀伤能力,来反映TNF-α的生物学活性。若这种肿瘤细胞先用 3 HTdR 标记,则被杀伤后 ...

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可溶性白细胞介素2受体检测实验

将抗Tac特异性单克隆抗体Ab1吸附于固相载体,识别细胞培养上清或血清等标本中Tac并与之结合。应用辣根过氧化物酶标记的识别另一种Tac表位的特异性单克隆抗体Ab2识别固定于固相载体的Tac并与之结合。通过酶催化底物显色反映待检标本中游离Tac的水平。 1.  刺激外周血单个核细胞(PBMC) 取外周血10 ml,肝素抗凝,常规分离单个核 细胞,加至24 孔细胞培养板,2×10 ...

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白细胞介素8(IL- 8)检测实验

采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体,其中一株(4D7)作为包被抗体,以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体,与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。 1.  包被 pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1 μg/ml,加入96 孔板,100 μl/孔,放4 ℃,36 小时。 2.  封闭 ...

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人α2a,α2b干扰素检测实验

选用2种针对rHuIFN-α2a和rHuIFN-α2b分子不同表位的McAb,1种McAb作为包被抗体,另1种McAb标记辣根过氧化物酶(HRP)作为结合物,催化底物显色。根据标准品OD值绘制标准曲线,在标准曲线上查出待检标本的含量。 1.  向ELISA板中加入稀释好的包被抗体100 μl/孔, 4 ℃  24~48 h 2.  洗3次,加入10倍连续稀释的待测标本( ...

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免疫荧光补体法实验

用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原-抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与补体结合,从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。 免疫荧光法目前多用于临床检验: 1. 检测组织内免疫球蛋白或免疫复合物,如肾炎之肾穿刺标本、红斑狼疮之皮肤组织等; 2. 检查血液内自身抗体,此时常用小鼠的 组...

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大肠杆菌DNA聚合酶Ⅰ Klenow片段实验-标记DNA的3‘末端

选用本方法可产生用于放射自显影的 32 P末端标记分子量标志物。放射自显影带的强度与片段长度无关,标记DNA可稳定数月之久。 1.  在20 μl 反应体积中,用可产生5’突出端的限制性内切酶消化0.1~0.4 μg DNA。 2.  加入20 μl Ci所需的[α- 32 P]标记下dNTP(400~800 Ci/mm...

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免疫印迹与免疫检测实验-第二抗体欧联物进行免疫检测

1.  将膜放入可热密封的塑料袋,加5 ml 封闭液,密封塑料袋,在旋转摇床或摆动平台中摇动30~60 min。 2.  用封闭液稀释第一抗体(取决于抗体和检测系统,以1:10~1:100 000稀释)。 3.  打开袋子,倾去封阻液,以稀释的第一抗体工倾代替之。在室温下持续摇动30~60 min。 4.  带着手套从塑料袋子中取出膜,放在塑料盒子中摇动着用200 ml TT...

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免疫印迹与免疫检测实验-亲和素-生物素偶联

1.  在旋转摇床或摆动平台中持续摇动使膜与合适的封闭液平衡。对于硝酸纤维素膜或PVDF膜,需在室温封闭30~60 min。尼龙膜则需在37℃封闭2 h。 2.  用TTBS溶液(用于硝酸纤维素膜或PVDF膜)或TBS溶液(用于尼龙膜)稀释第一抗体。 3.  从封闭液中取出膜,放入第一抗体溶液中。于37℃缓慢摇动30 min。 4.  在TTBS或TBS中洗膜3次,毎次超过15 mi...

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