毕赤酵母细胞重组蛋白表达纯化服务

服务概览

酵母表达系统是真核表达蛋白的常用系统之一，具有真核表达系统的许多优点：如蛋白加工折叠、翻译后修饰等。且酵母蛋白表达的操作较哺乳动物来说相对简单。同为酵母表达系统，毕赤酵母表达系统比酿酒酵母表达系统表达水平更高且可进行细胞的高密度培养。巴斯德毕赤酵母是近几年发展起来的较为完善，被广泛用来表达外源蛋白的甲醇营养型酵母表达系统。（下文所提到的酵母蛋白表达均为巴斯德毕赤酵母）

毕赤酵母细胞表达系统报价

多种载体和酵母菌株可供选择

分步收费，完全定制

服务内容	价格（元）	周期（工作日）
基因合成（含密码子优化）或者载体构建	询价	询价
筛选阳性克隆(PCR)(质粒线性化，电转化，抗性筛选克隆)	1800	7
表达小试(10个克隆，SDS-PAGE和WB结果)	1800	7
最优克隆200ml表达纯化交付蛋白样品，以及详细的实验报告	2400	10-12
实验报告	0	1

服务过程中，每一步都有标准的实验报告，由甲方决定是否要进行下一步的实验，以及下一步实验的内容。

客户验证小试样品无误后，可选择放大生产。5000元/L

其他说明

虽然酵母种类有1500多种，但是用于重组蛋白表达的一般有2种：毕赤酵母和酿酒酵母。毕赤酵母表达系统与酿酒酵母表达系统相比，前者表达水平更高而且可进行高密度的细胞培养。同时，酿酒酵母表达系统质粒容易丢失，传代不稳定，而毕赤酵母表达系统所有的表达载体都要整合到酵母的基因组上。另外，与Saccharomyces cerevisiae相比，Pichia在分泌蛋白的糖基化方面具有优势，因为它可能不会过度糖基化。公司提供的毕赤酵母感受态有：X33、GS115、KM71等。

X33、GS115、KM71酵母特征

酵母菌株	特征
GS115	表型：HIS4-, Mut+；筛选含HIS4的表达载体。
X-33	表型：HIS4+, Mut+； X-33毕赤酵母被推荐用来表达含有Zeocin抗性的载体载体重组质粒，例如pPICZ A,B,C系列的载体。X33毕赤酵母含有AOX1基因，产生的转化株是Mut+基因型。
KM71	表型：Mut^S, Arg⁺；KM71转化株只能产生出His⁺Mut^S菌株。
SMD1168	表型：His4^-, pep4^-, Mut⁺；蛋白酶A缺陷型（pep4^-）

说明：HIS4-，组氨酸缺陷型，在缺乏组氨酸的培养基中无法生长；如果表达载体上携带有组氨酸合成基因，可补偿宿主菌的组氨酸缺陷，因此可以在不含组氨酸的培养基上筛选转化子。

Mut⁺和Mut^s：毕赤酵母表达系统中，乙醇氧化酶有2种基因编码，即AOX1和AOX2。但是菌株利用甲醇的速度主要由AOX1编码的AOX1蛋白决定。当AOX1缺失，只存在AOX2时，细胞利用甲醇的能力低，在甲醇培养基上生长缓慢的菌株表型为Mut^s；相反，AOX1存在，细胞在甲醇培养基上生长较快的菌株表型为Mut⁺。Mut⁺和Mut^s菌株在没有甲醇存在的情况下生长速率一样，存在甲醇的情况下，AOX1启动子被强烈诱导，Mut⁺比Mut^{s生长的更快（4-5倍）}

上述菌株都是甲醇诱导型菌株，除了X33外，其他都是组氨酸缺陷型。在以葡萄糖或者甘油等为碳源的培养基上生长时，AOX1基因的表达受到抑制。而在以甲醇为唯一碳源时，宿主菌的AOX1基因被强烈诱导，使得目的基因大量表达。

毕赤酵母适宜的生长温度是28至30度，一般可以设置在30度培养，温度超过32度对蛋白的表达是有害的，并可能导致细胞的死亡。

从研究结果来看, 蛋白胞内表达时, 可优先考虑用Mut^s表型, 对于分泌表达, Mut⁺ 和 Mut^s都可使用。