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如何提高蛋白质的表达量?

相信如何提高目的重组蛋白的诱导表达量是很多同学在研究中都会遇到的问题。记得小编在读书的时候就经常在研究这个问题,泡了无数论坛,看了无数帖子,尝试过IPTG的诱导浓度、培养基成分、诱导温度、诱导时间,甚至让别的公司帮忙做密码子优化(将目的片段通过全基因合成的方式合成出来)。总的来说,提高IPTG浓度是可以提高目的蛋白的诱导表达量的,但一般也就用到1mM的浓度,再高对细胞有毒性; 培养基营养越丰富,表达量越高,所以如果追求表达量的话,就不要用LB培养基了,用自动诱导培养基吧; 诱导温度,温度越低表...

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8个WRKY转录因子在水稻叶片生长和抗病过程中的表达分析

WRKY是植物中最大的一类转录因子家族,该家族蛋白质中都含有WRKY结构域,这种结构域由60个氨基酸残基组成,其N端有保守的WRKYGQK 序列,WRKY由此得名,WRKY结构域的C端是锌指结构。根据蛋白质中WRKY结构域的数目和锌指结构特征,WRKY家族被分为三类。WRKY家族成员 广泛地参与植物的各个生理过程,如OsWRKY13参与了抗病、氧还平衡(Redoxhomeostasis)、生物胁迫响应和生长发育等过程,超量表达 OsWRKY13影响了这些途径中500多个基因的转录。OsWRKY2...

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ANKIB1单克隆抗体的制备及应用

锚蛋白重复序列(Ankyrin repeat,ANK)是最常见的一种介导蛋白质-蛋白质相互作用的蛋白模体,常与F-box、锌指、PDZ(PSD-95/Dlg/ZO-1)、离子转 运结构域和蛋白激酶等结构域共存,其中F-box与蛋白质泛素化密切相关。RING(Really interesting new gene)结构域则是E3泛素连接酶中最常见的结构域,大部分含RING结构域的蛋白具有E3连接酶活性。含锚蛋白重复结构域和IBR结构域蛋白1(Ankyrin repeat and IBR domai...

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C型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备与鉴定

口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)有7个血清型和80多个亚型,且极易发生突变. C型FMD在印度、菲律宾和哈萨克斯坦等我国周边国家曾有流行,是重点防控疫病. 单抗与多抗血清相比,更为高效、准确且特异性强,目前已被广泛用于传染病的研究诊断和治疗中.口蹄疫防控的关键是对口蹄疫、流行血清型的快速鉴定和免疫接 种,而获得型特异性抗体是口蹄疫病毒定型和加强其疫苗研究的前提.本试验制备抗C型FM-DV的特异性单抗,旨在为C型口蹄疫的诊断及预防提供特异、敏感 的试...

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α-乳白蛋白单克隆抗体的制备及斑点印迹定性检测方法的建立

牛乳及其乳制品中含有丰富的营养成分,是人们摄取蛋白质的重要来源;同时,牛乳又是主要的过敏食物之一。其中,牛乳中alpha-乳白蛋白与人乳alpha-乳白蛋 白的氨基酸残基有很高的相似度,对初生婴儿来说是一种很重要的蛋白质来源,但该蛋白又被认为是牛乳中主要的过敏原之一。据报道,超过19%的牛乳过敏均是 由alpha-乳白蛋白引起。因此,开展针对食品中alpha-乳白蛋白的检测研究具有重要的理论和现实意义。 目前,用于过敏原检测的主要方法为酶联免疫吸附法(ELISA),该法具有高的灵敏度,但检测步...

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A群猪轮状病毒VP7蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

轮状病毒是世界范围内引起婴幼儿及多种幼畜急性腹泻的一个重要病原体。仔猪轮状病毒性腹泻是由轮状病毒引起的一种以厌食、呕吐、腹泻、脱水为特征的 传染病,导致仔猪死亡率升高或生长缓慢,给养猪业带来巨大经济损失。轮状病毒属于呼肠孤病毒科、轮状病毒属,可分为A~G 7个群,感染幼畜的轮状病毒多为A群。完整的病毒粒子表面光滑,无脂蛋白囊膜,含有完整外壳的实心光滑型颗粒,65~80nm,实心颗粒具有传染性。病毒 体核心由11段不连续的双股RNA组成,编码6个结构蛋白和6个非结构蛋白。VP7蛋白由基因片段...

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HA蛋白多肽抗体的设计、制备与鉴定

牛皮蝇蛆病是由牛皮蝇寄生于牦牛或黄牛体内引起的一种家畜寄生虫病,牛只感染后可使产奶量和产肉量降低,牛皮穿孔,给养牛业带来巨大的经济损失。研 究发现,纹皮蝇和牛皮蝇幼虫能在宿主组织中移行8个月,其分泌的四种丝氨酸蛋白酶―皮蝇素,起免疫抑制作用,以致宿主不能用免疫机能杀死蝇的幼虫。皮蝇素 A(HyderminA,HA)是牛皮蝇一期幼虫在宿主体内游行时分泌的一种丝氨酸蛋白酶。皮蝇素A具有抗炎、抑制补体反应等功能。 据研究报道,HA调节宿主免疫功能有下列3种机制:HA抑制IL-10生成,从而...

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Class I新城疫病毒NP重组蛋白的表达及广谱性NDV单克隆抗体的制备

新城疫(Newcastle disease,ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)强毒株引起的一种急性、烈性、高度接触传染性禽传染病,严重危害世界养禽业的健康发展。NDV是副黏病毒科 (Paramyxoviridae)、禽腮腺炎病毒属(Avulavirus)的唯一成员,其基因组为不分节段的单股负链线性RNA。按照3'- Leader-NP-P-M-F-HN-L-Trailer-5'的顺序,NDV依次编码核衣壳蛋白(NP)、磷蛋白(P)、基质蛋白(M)、融合...

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11型HPVE7蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)是一种双链DNA病毒,约有200余种亚型。根据病毒的基因组结构、生物学特性和致病性,可分为五大类,即α、β、γ、μ和ν,6型 和11型HPV是低危型,属于α乳头瘤病毒,超过90%的生殖器疣是由此类HPV引发的。11型HPV主要感染鳞状上皮,导致上皮增生,引起各种皮肤疣和 黏膜乳头瘤。HPV11E7基因全长297bp,编码的HPV11E7蛋白含98个氨基酸,相对分子质量(Mr)约为10800。HPV11E7蛋白定位 于细胞核,其C...

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ASPP1蛋白抗体制备及ASPP1在结肠癌组织中的表达

P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53,AS-PP)家族是新近发现的与P53有关的肿瘤抑制基因家族。研究此蛋白如何促进肿瘤细胞凋亡已成为当今热点话题。现己发现了该基因家族的3个 成员:ASPP1、ASPP2和iASPP。对ASPP的调控机制需要进一步探讨。通过抑制iASPP或激活ASPP来提高P53诱导细胞凋亡的功能。本 研究根据生物信息学软件分析人ASPP1蛋白的二级结构、亲水性、疏水性和抗原性等理化性质,经同源性检索,综合考虑抗体设计的其...

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