BA-ELISA是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素（B）与亲和素（A）间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68 kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力（结合常数高达1015M-1）。生物素很易与蛋白质（如抗体等）以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原（或抗体）分子的目的。 ...

硝酸纤维素膜和醋酸纤维素膜具有很强的静电吸附力，在中性条件下即可有效 地吸附蛋白质等生物大分子。因而，将抗原吸附于纤维素膜后，就可利用纤维素膜 作为固相进行抗原抗体反应。当加入抗体后（即可与膜上的抗原结合），然后再加入 带有标记物的抗体，使标记通过抗抗体和相应抗体的结合间接地交联于纤维素膜 上。加入标记物相应的底物后，标记物即可与底物作用形成不溶性产物，呈现斑点状 着色...

尽管辣根过氧化物酶（HRP）可以催化Luminol-H 2 O 2 反应体系产生化学发光， 但由于该体系的检测灵敏度不够高，不能满足酶联免疫测定的要求。因此，为了提 高体系的检测灵敏度，可将HRP催化H 2 O 2 ...

125 I标记的单克隆抗体能与具有相应抗原的细胞结合，有数百倍以上未 标记的特异性抗体同时存在的条件下，则标记抗体的结合受到竞争性抑制。根据不 同稀释度抗体分别与相同数量细胞结合后所测得的特异性计数值，可以计算出每个 细胞表面的平均抗原密度以及抗原和抗体的亲和力。 1.  硅化规格相同的5 ml玻璃管，双蒸水冲净后烤干， 每次实验分6～12...

溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合，在补体参与下，使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。根据所操作的方法不同可分为直接溶血空斑试验，间接溶血空斑试验，琼脂固相法，小室液相法，单细胞层法等等。 1.  底层琼脂平皿的制备 将1.4 ％琼脂加热融化后倾注于平皿内，每个平皿6 ml， 凝固后置湿盒37 ℃备用。 ...

白细胞介素1是一种重要的细胞因子，主要由单核-巨噬细胞产生，IL-1不仅对多 种免疫活性细胞有重要的调节功能，而且与发热、炎症发生以及某些疾病的病理变 化有关。目前对IL-1产生水平的检测主要应用生物学活性检测的方法。 一、ConA刺激小鼠胸腺细胞检测IL-1 生物学活性 小鼠胸腺细胞在丝裂原刺激下表达IL-1受体，在有...

IL-2主要由活化T细胞产生，又为T细胞增殖所必需，故称T细胞生长因子（ TCell Growth factor, TCGF ）。IL-2产生的水平反映T细胞的功能，仅是免疫调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关，CTLL是C57BL/6来源的。鼠杀伤性T淋巴细胞细胞系，由Gills 1977年建立，只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL-2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。 ...

1.  用低频率切割的不同限制性内切酶分别完全消化DNA。 2.  用 32 P末端标记消化产物，5’末端可先用小牛肠碱性磷酸酶处理。 3.  用T4多核苷酸激酶进行标记。 4.  3’末端可先用大肠扞菌DNA聚合酶ⅠKlenow片段或T4 DNA聚合酶来标记。 5.  用第二种内切酶消化DNA片段，通...

IL-6在体外能促进B细胞杂交瘤的生长，故又称为杂交瘤生长因子（ HGF）。小鼠B细胞杂交瘤7TD1是一株对IL-6依赖的细胞系，由Van Snick 1986年建 立，只有在IL-6存在的培养基中才能生长，可以作为指示细胞来测定待检样品中IL-6 水平。这类IL-6依赖的小鼠B细胞杂交瘤细胞系还有MH60BSF2、B9等。 1.  IL-6依赖的7TD1细胞用无FCS的RPMI164...

干扰素能刺激某些指示细胞（如人羊膜上皮细胞Wish株、人喉癌细胞株Hep-2以 及人胚肌皮或肺单层细胞）产生抗病毒蛋白，从而使细胞免受水疱性口炎病毒（VSV） 的攻击，根据待测样品不同稀释度的保护能力，计算出干扰素生物学活性单位。 1.  96 孔培养板中加入不同稀释度的IFN和标准IFN， 每个稀释度设3 孔，每孔50 μl，病毒对照不加IFN 2. ...