今天我们讲讲一种很经典的重组子筛选技术——蓝白斑筛选。先介绍下两种非常常用的蓝白斑筛选质粒pUC18和pUC19。背景：细菌的乳糖操纵子（lac）包含一个叫lacZ的基因，它编码的蛋白是β-半乳糖苷酶。乳糖操纵子可以被乳糖或者乳糖类似物IPTG给激活，启动下游基因的表达。（严格的来说，IPTG是与lac阻遏物结合，让它失活来启动lac的表达的）。β-半乳糖苷酶可以降解一种连接有染料的底物（X-gal，5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷），生成半乳糖和一种不溶于水的蓝色色素。蓝白斑筛选试验...

常用的大肠杆菌表达菌株外源重组蛋白的表达往往表达量非常高，远远超过细菌自身蛋白的表达水平，从而会导致细胞生长缓慢。另外，有些蛋白对细菌有毒性，特别是那些不可溶的，作用于DNA的，以及具有酶活性的。因为这个原因，我们一般会用工程改造的大肠杆菌来表达重组蛋白。 有些很重要的突变可以兼容很高的蛋白表达水平：ompT：携带这个突变会导致外膜蛋白酶VII的缺失，而外膜蛋白酶VII会降解表达出的蛋白。hsdSB (rB- mB-): 携带这个突变会形成失活的限制性内切酶/甲基化系统，从而不会让外源...

在一项新的研究中，来自美国凯斯西储大学医学院的研究人员研究了一种被称作周期蛋白依赖性激酶5（Cdk5）的关卡蛋白，它也是一种在神经细胞和肿瘤细胞发展中起着至关重要的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。他们特地研究Cdk5在成神经管细胞瘤（medulloblastoma）---一种常见的生长迅速的儿童脑瘤---发展中的作用。他们发现这种关卡蛋白允许某些脑瘤细胞（如成神经管细胞瘤）躲避免疫系统检测。相关研究结果发表在2016年7月22日那期Science期刊上，论文标题为“Cdk5 disruption att...

2017年 12 月 06 日更新：有两个地址不可用，新增一个地址。 顺带推荐一款浏览器扩展： Pubmedy：显示影响因子+引用数、Sci-hub全文下载的浏览器扩展 很多人都知道一个下载文献的好地方 Sci-Hub，但是现在 Sci-Hub 的站长 Alexandra Elbakyan 女士面临着爱思唯尔的诉讼，让其面临数百万美元的赔偿。因此现在 Sci-Hub 在某些时候可能不可用了。不过 Alexandra E...

1.       什么是包涵体蛋白？ 重组蛋白在大肠杆菌中高水平表达的时候经常导致蛋白聚集而形成不溶的、无活性的包涵体。包涵体一般由蛋白质、DNA和脂类物质组成，密度比水大，约1.3mg/ml，易于分离。包涵体蛋白中存在一些与蛋白的天然构象类似的二级结构，所以可以用非变性浓度的去垢剂直接将某些蛋白溶解出来，得到有活性的蛋白质。由于包涵体中通常含有细菌的外膜蛋白OmpT，它是个蛋白酶，能在4-8M尿素条件下降...

在最近过去一年的时间里，FDA陆续批准了9个癌症靶向新药，此外还批准了4个抗癌药物新增适应症。然而，在这些癌症靶向药物当中，仅有25.4%在中国上市。 令人欣慰的是，有些患者已经到美国就诊并使用到了一些新药，为战胜癌症增加了筹码。更加可喜的是，目前很多新药的临床试验正在国内开展，例如免疫疗法药物PD-1抑制剂Nivolumab和Pembrolizumab以及肺癌靶向药Osimertinib（AZD9291）等。 希望中国的患者能早日受益于这些新药。根据疾病种类和...

Bac-to-Bac杆状病毒表达系统是一种快速、高效产生重组苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcNPV）的技术（Luckow et al., 1993），利用细菌转座子原理，在大肠杆菌内就能完成重组病毒的构建，取名为Bac-to-Bac表达系统，意即从细菌（bacterium）到杆状病毒（baculovirus），革命性地改变了重组昆虫杆状病毒的构建方法。 其基本原理为：将一个改造后的AcNPV基因组转化入大肠杆菌，使它像普通质粒一样能在细菌中复制（由于太大，只限单拷贝），将其称之为杆状病毒穿梭载体...

野生的大肠杆菌（E.coli）的基因组DNA中有470万个碱基对（bp)，内含4288个基因。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型 (Phenotype)，把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（G...

双特异性抗体是一类可以同时特异结合2个不同抗原的双功能的抗体分子。目前，至少有30 多种双特异性抗体药物处于临床研究阶段。双特异性抗体在自然状态下不存在，只能通过人工制备，经过多年的研究及技术发展，双特异性抗体在结构上出现了许多不同的设计策略。按照其是否含有Fc 功能区，主要分为2 类: 含有Fc 区的双特异性抗体和不含Fc 区的双特异性抗体。1.1    含有Fc 区的双特异性抗体抗体的Fc结构域的生物学功能有：抗体依赖的细胞介导的细胞毒作用（ADCC）和补体介导...

噬菌体（英语：bacteriophage或者phage）是病毒的一种，其特别之处是专以细菌为宿主，较为熟知的噬菌体是以大肠杆菌为寄主的T2噬菌体。跟别的病毒一样，噬菌体只是一团由蛋白质外壳包裹的遗传物质，大部分噬菌体还长有“尾巴”，用来将遗传物质注入宿主体内。超过95%已知的噬菌体以双螺旋结构的DNA为遗传物质，长度由5,000个碱基对到5,000,000个碱基对不等；余下的5%以RNA为遗传物质。噬菌体的基因组有单链DNA、双链DNA和RNA这三种类型；有线性、环状两种形式。噬菌体是一种普遍存...