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简单粗暴的qPCR引物设计

本文仅针对从来没有做过或者即将做过qPCR引物的小伙伴。 全文分两部分,第一部分就是简单粗暴的设计qPCR引物,到这一步,单纯需要qPCR引物的小伙伴可以去联系公司订购引物了,有耐心的小伙伴可以看下第二部分,松哥有大招留着,绝对是泡萝莉师妹、约冷艳师姐、钓鲜肉师弟的神器。 松哥一向高效率,按照老外的传统,咱开门见山,需要的准备工作如下: 一个目的基因 ...

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流式细胞术实验详解

目前,流式细胞术广泛应用于细胞表面和细胞内分子表达特征的分析,界定不同种类的细胞群,测定分离出的亚类纯度,分析细胞的大小和总量,它可以同时分析单个细胞的多个参数。它主要用于检测标记在抗体上的荧光强度,这些荧光抗体则可以检测与特定细胞分子结合的蛋白或配体,如与 DNA 结合的溴化丙啶 (PI) 等。 染色步骤包括:将培养的细胞或组织样品制成单细胞悬液,然后将细胞放入管子或酶标板中与荧光标记或未标记的抗体孵育。之后将细胞放入流式细胞仪中进行分析。 悬浮缓冲液中染色...

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生物导弹中的新秀---Biparatopic ADC

毒素分子和特异性抗体偶联在一起,这些特异性的抗体能够只与癌细胞表面特有的受体结合并被内吞入细胞内部,与此同时毒素分子也会被携带进细胞内,在胞内一些酶的作用下毒素分子会被释放,进而发挥杀伤作用,杀死癌细胞。这就是抗体偶联药物(ADC)的作用原理。目前,抗体偶联药物是治疗癌症的一种非常有效的方法,有望成为医药行业的制“重磅炸药”级产品。 T-DM1是将细胞毒类药物DM1通过稳硫醚链偶联到曲妥珠单抗上而成,用于治疗HER2呈阳性的转移性乳腺癌患者时,可显著改善患者的生存时间,并...

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抗氧化剂!你为什么要帮肿瘤君?

在很多人眼中,甚至包括很多专业的医生都认为:抗氧化剂对人们有好处。这个观点就像是一座大山,强大权威,抗氧化剂被广泛应用于糖尿病、癌症等疾病的治疗中。 而自2013年,DNA之父沃森在他“amongmy most important work since the double helix”一文提出了晚期转移性癌症中关于氧化剂和抗氧剂作用的一项新假说。沃森指出在晚期癌症中抗氧化剂实际上会加速癌症进程,有多篇文献报道抗氧化促进肿瘤的发生,此后,关于抗氧化剂的争议一直在持续,抗氧...

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肠道微生物躺枪,《Cell》给橄榄油打广告

故事是这样的 美国克利夫兰诊所细胞分子医学研究所的研究人员发现,在冷榨的特级初榨橄榄油中有一种物质叫做DMB(3,3-二甲基-1-丁醇)。这种天然的化合物能够帮助降低小鼠机体中TMAO级动脉粥样硬化的水平。研究成果发表于最新一期《Cell》杂志中。 肠道微生物又躺枪了 随着生活环境与饮食习惯的改变、工作压力的加大及运动量的减少,肥胖、高血压、高血脂、高血糖等代谢综合征的症状严重影响着人们的生活质量。代谢综合征严重并发症中包括心血管事...

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新型体外重组克隆方法,你了解了吗?

同传统的基于限制性内切酶和DNA连接酶的克隆方法相比,新型体外重组克隆具有不依赖限制酶切位点和实现无痕克隆以及多片段的同时组装的特点。新型体外重组克隆主要包括不依赖连接克隆(LIC)和一步等温反应克隆。 · 不依赖连接克隆 · 1不依赖连接克隆(LIC) 1990年,Charalampos Aslanidis和Pieter J.de Jong报道了一种不依赖于连接反应的克隆方法。其原理如图1所示: 图1 ...

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CNS多篇关注胚胎研究,要火的节奏!

Science&Cell:实时观测活细胞体内单个mRNA分子的翻译过程 学过中学生物的我们都知道分子生物学的中心法则,即DNA转录成RNA,RNA翻译成蛋白质,所有的这些逻辑过程都是根据实验结果进行推论并验证后成立的,然后,并没有亲眼所见。所谓眼见为实,有图才有真相。为此,研究者们一直试图尝试各种现代学手段观察到这一过程。 本期的Science和Cell在同一天分别刊登了来自四个不同实验室(其中就包括著名华人美女学者----哈佛大学庄小威),针对同一现...

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乳腺癌分子分型与个体化治疗指南

我们知道在乳腺癌治疗中上图事件常有发生:临床诊断一样,治疗一样,效果却背道而驰,这是为什么呢? 为了回答这个问题,我们从乳腺癌诊疗和效果深扒,首先我们来看一下乳腺癌分子分型的标准。 乳腺癌的分子分型标记物检测和判定(点击查看大图) 针对不同分型需要选择不同的治疗方案,抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2015版)对此作了推荐。 但...

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免疫荧光实验步骤

免疫荧光是标记免疫技术发展最早的一种,它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术,通过将抗体与一些示踪物质结合,利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。免疫荧光步骤包括,细胞固定和通透,封闭,孵育一抗,二抗等。除了这些基本步骤,以下建议可以帮助您获得更好的实验结果。 1细胞固定和通透 为达到最佳的检测效果,细胞需要经过固定和通透。这些步骤非常关键,细胞和抗原需要保证最佳的结构,并利于抗体与抗原结合。通常情况下,需要通过以下步骤得以实...

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