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正常细胞常规核型的标本制备实验-肿瘤细胞的染色体标本制备

利用肿瘤细胞无限繁殖的特点,掌握其体外生长动态,取处于对数生长期的细胞便可获得丰富的分裂相。肿瘤细胞染色体异常包括两个方面:1.  结构异常  即在肿瘤细胞常出现的染色体畸变,包括双着丝点染色体、环状染色体、断裂的染色体、染色体裂隙及微小体等。2.  数目异常  由于肿瘤细胞分裂失去应有的调控,可出现亚二倍体、超二倍体和多一倍体数目异常现象。肿瘤细胞染色体制备技术在细胞生物学、医学遗传学的基础研究和临床诊断、愈后观察等方面均有广泛用途。 1.  ...

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染色体提前凝集标本制备实验

七十年代初,由于发现M期细胞内有某种促进染色体凝集因子,它无种属特异性,所以在细胞融合和染色体技术的基础上,建立了制备染色体提前凝集标本的方法。即让M期细胞与间期(I期)细胞融合,从而诱导I期细胞染色质提前浓缩成染色体。形成的这种染色体称提前凝集的染色体(PrematurelyCondensedChromosome,PCC)。这项技术已应用于细胞周期分析、正常细胞和肿瘤细胞染色体的微细结构的研究、多种因素作用细胞使染色体损伤及修复效应的研究,预测某种血液病的病程、愈后及复发的临床实...

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石蜡切片免疫组化实验-即用型(Envision)快速酶免疫组化二步法

根据聚合酶技术把辣根过氧化物酶抗鼠或/和抗兔IgG分子结合在多聚酶上形成多聚物分子,其与待检的抗原特异性的结合后,加入底物显色。 一、特点 1.  在切片加上一抗后,第二抗体标记多聚螯合物酶(HRP)的复合物与一抗结合,在多聚螯合物上有大量的HRP分子,使抗原信号有显著的放大,其敏感性较SABC、SP法高。 2.  由于多聚物在体内不存在,又不使用生物素,从而避免了由于生物素引起的非特异性背景染色,...

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石蜡切片免疫组化实验-卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法

1.  4%多聚甲醛常规灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)中过夜。蜡块制作。切片,贴片。0.01 M KPBS清洗5 min×3后; 2.  加入配好的0.3%的过氧化氢甲醇溶液(甲醇80 ml+0.01 M KPBS 100 ml+30%过氧化氢)30 min,以消除内源性过氧化物酶的影响,0.01 M  PBS清洗5 min×3; 3.  加入配好的0.3% Triton X100(30% Triton X10...

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石蜡切片免疫组化实验-链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物(SABC)法

SABC(Strept Avidin-Biotin Complex)法是一种显示组织和细胞中抗原分布的简便而敏感的免疫组化染色方法,是众多免疫组织化学方法的一种。SABC法:一抗+ 生物素标记二抗+ 滴加试剂SABC(链霉卵白素+ 辣根酶标记生物素)+ 辣根酶底物显色。目前常用的亲和素从链霉菌(streptomyces)培养物中提取,因此称为链霉亲和素—生物素—过氧化物酶复合物技术(streptavidin biotin-peroxidase complex metho...

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MTT(四唑盐)比色法

MTT法是Mosmann 1983年报道的,以后此方法得到了迅速发展并广泛应用于临床与科研研究。其原理是活细胞中脱氢酶能将四唑盐还原成不溶于水的蓝紫色产物(formazan),并沉淀在细胞中,而死细胞没有这种功能。二甲亚砜(DMSO)能溶解沉积在细胞中蓝紫色结晶物,溶液颜色深浅与所含的formazan量成正比。再用酶标仪测定OD值。 一、经验总结 1.  首先细胞的接种密度一定不能过大,一般每孔1000个左右就够了,我认...

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肿瘤细胞体外传代培养及保种

一、细胞复苏与培养 将液氮或-80℃保存的肿瘤细胞于37℃ 水浴, 快速溶化, 用8.0ml 培养基混匀已融化的肿瘤细胞悬液, 于1500 转/分, 离心3 分钟。弃上清, 再吸取8.0ml 培养基质混匀细胞沉淀, 再1500 转/分, 离心3 分钟, 弃上清, 细胞沉淀用1.0ml 培养基混匀, 备用。另取一个75cm2 方瓶, 加入14.0ml 培养基质, 将上述制备的含肿瘤细胞悬液(1.0ml)加入此方瓶中, 于37℃,5%CO2 孵育...

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细胞免疫荧光步骤

细胞爬片免疫荧光实验步骤 第一天: 1. 在培养板中将已爬好细胞的玻片用PBS浸洗3次,每次3min; 2. 用4%的多聚甲醛固定爬片15min, PBS浸洗玻片3次,每次3min; 3. 0.5%Triton X-100( PBS配制 )室温通透20min(细胞膜上表达的抗原省略此步骤); 4. PBS浸洗玻片3次,每次3 min,吸水...

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斑点金免疫渗滤测定(DIGFA)实验

斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上,改用胶体金标记物代替酶,省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜(NC膜)为载体,将试剂及标本滴加在膜上,通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成,阳性结果在膜上呈红色斑点。 一、试剂及材料 1.  渗滤装置:为一塑料小盒(4x3x0.6 cm),分为底、盖两层,盖的中央有一个直径0.5 cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料,盖孔下,紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭...

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