免疫荧光补体法实验

用特异性抗体和补体的混合液与标本上的抗原反应,补体就结合在抗原-抗体复合物上,再用抗补体的荧光抗体与补体结合,从而形成抗原抗体补体复合物-抗补体荧光抗体复合物,在荧光显微镜下呈现阳性荧光的部位就是免疫复合物存在处,此法常用于肾穿刺组织活检诊断等。 免疫荧光法目前多用于临床检验:

1. 检测组织内免疫球蛋白或免疫复合物,如肾炎之肾穿刺标本、红斑狼疮之皮肤组织等;

2. 检查血液内自身抗体,此时常用小鼠的 组织标本作为抗原,滴加病人血清后,用带有荧光素的抗人免疫球蛋白抗体作间接免疫荧光法;

3.细胞表面抗原鉴定,适用于肿瘤细胞、淋巴细胞等,可在管内悬浮 状态标记染色后转移至玻片上观察,或用流式细胞仪(FCM)进行分类、定量计数;

4. 荧光示踪研究。

1. 标本处理与直接法相同→将适当稀释的抗体及补体等量混合滴于切片上,将标本放入湿盒中37℃作用30min→用PBS洗2次,每次5min,搅拌或振动,吹干→滴加适当稀释的抗补体荧光抗体,在37℃中染色30min→用PBS洗2次,每次5min,振动,蒸馏水洗1min→甘油缓冲液封片,荧光显微镜下检查。

2. 对照染色

可作抗原对照、抗血清对照和灭活补体对照,将补体经56℃、30min灭活处理后,按补体同样稀释倍数与抗体等量混合,进行补体法染色结果阴性。

2014-12-12