基本信息
- 载体名称:
- pCMV-SV40-Neo-G6PD(human)-FLAG
- 载体抗性:
- Kanamycin
- Refseq ID:
- NM_001042351.3
- 载体长度:
- 5860 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 筛选标记:
- Neo/G418
- 启动子:
- CMV
- 5'引物:
- CMV-F
- 载体标签:
- FLAG
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 37℃
- 表达方法:
- Transient
- 描述:
- Homo sapiens glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD), transcript variant 2, mRNA
产品信息
质粒编号:V034220
质粒名称:pCMV-SV40-Neo-G6PD(human)-FLAG
规格:100 μg (转染级)
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克隆选择
RefSeq / 转录本
筛选标记
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，供学术研究使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
人G6PD ORF 克隆 (NM_001042351) (编号: V034220)序列
LOCUS V034220 5860 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION V034220
VERSION V034220
KEYWORDS .
SOURCE .
ORGANISM .
.
FEATURES Location/Qualifiers
enhancer 67..370
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
/label="CMV enhancer"
promoter 371..574
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
/label="CMV promoter"
promoter 620..638
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
/label="T3 promoter"
regulatory 673..682
/note="vertebrate consensus sequence for strong initiation
of translation (Kozak, 1987)"
/regulatory_class="other"
/label="Kozak sequence"
CDS 682..705
/codon_start=1
/product="FLAG® epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
/transl_table=1
/translation="DYKDDDDK"
/label="FLAG"
CDS 721..2265
/label="G6PD(NM_001042351)"
/note="G6PD(NM_001042351)"
/gene="G6PD"
primer_bind complement(2289..2305)
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
/label="KS primer"
promoter complement(2362..2380)
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
/label="T7 promoter"
polyA_signal 2654..2775
/note="SV40 polyadenylation signal"
/label="SV40 poly(A) signal"
rep_origin complement(2782..3237)
/direction=LEFT
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
/label="f1 ori"
promoter 3264..3368
/gene="bla"
/label="AmpR promoter"
promoter 3370..3727
/note="SV40 enhancer and early promoter"
/label="SV40 promoter"
CDS 3762..4556
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin®)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/transl_table=1
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF*"
/label="NeoR/KanR"
polyA_signal 4788..4835
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
/label="HSV TK poly(A) signal"
rep_origin 5164..5752
/direction=RIGHT
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
/label="ori"