Note: The pGEMEX-1 plasmid is a T7 expression vector designed for multiple applications, including cloning, in vitro transcription, and single-stranded DNA (ssDNA) production.
基本信息
- 载体名称:
- pGEMEX-1
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 3995 bp
- 载体类型:
- Cloning vectors
- 复制子:
- ori
- 克隆方法:
- Enzyme digestion and ligation
- 感受态:
- DH10B
产品信息
质粒编号:V011630
质粒名称:pGEMEX-1
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGEMEX-1 质粒 (编号: V011630)序列
LOCUS 40924_21389 3995 bp DNA circular SYN 13-JAN-2022
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3995)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 3995)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3995
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter complement(88..105)
/note="T3 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
CDS complement(873..905)
/label=T7 tag (gene 10 leader)
/note="leader peptide from bacteriophage T7 gene 10"
RBS complement(913..935)
/label=RBS
/note="efficient ribosome binding site from bacteriophage
T7 gene 10 (Olins and Rangwala, 1989)"
promoter complement(967..985)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
rep_origin complement(1248..1836)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(2010..2867)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(2868..2972)
/label=AmpR promoter
rep_origin 3306..3761
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
terminator complement(3860..3907)
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
promoter 3979..3995
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"