Note:
基本信息
- 载体名称:
- pCS
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 8420 bp
- 载体类型:
- Binary vector
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Plants
- 载体来源:
- Thomson JG, Cook M, Guttman M, Smith J, Thilmony R.
- 启动子:
- CaMV 35S (enhanced)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCS 质粒 (编号: V008155)序列
LOCUS V008155 8420 bp DNA circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION Exported.
ACCESSION V008155
VERSION V008155
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 8420)
AUTHORS Thomson JG, Cook M, Guttman M, Smith J, Thilmony R.
TITLE Novel sulI binary vectors enable an inexpensive foliar selection
method in Arabidopsis
JOURNAL BMC Res Notes 4 (1), 44 (2011)
PUBMED 21366919
REFERENCE 2 (bases 1 to 8420)
AUTHORS Thomson JG, Cook M, Guttman M, Smith J, Thilmony R.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (09-NOV-2010) Crop Improvement and Utilization Research
Unit, USDA-ARS-WRRC, 800 Buchanan Street, Albany, CA 94710-1105, USA
REFERENCE 3 (bases 1 to 8420)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 8420)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "BMC Res
Notes"; date: "2011"; volume: "4"; issue: "1"; pages: "44"
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(09-NOV-2010) Crop Improvement and Utilization Research Unit,
USDA-ARS-WRRC, 800 Buchanan Street, Albany, CA 94710-1105, USA"
SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8420
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 1..25
/label="LB T-DNA repeat"
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
regulatory complement(149..308)
/label="CaMV35S polyA terminator"
/note="CaMV35S polyA terminator"
/regulatory_class="terminator"
CDS complement(366..1202)
/gene="sulI"
/label="Dihydropteroate synthase type-1"
/note="Dihydropteroate synthase type-1 from Escherichia
coli. Accession#: P0C002"
transit_peptide complement(1203..1304)
/gene="Sul1"
/note="pea rbcS ribulose-bisphosphate carboxylase small
subunit transit peptide for plastid targeting"
promoter complement(1311..1982)
/label="CaMV 35S promoter (enhanced)"
/note="cauliflower mosaic virus 35S promoter with a
duplicated enhancer region"
misc_feature 2142..2166
/label="RB T-DNA repeat"
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS 3467..4093
/label="pVS1 StaA"
/note="stability protein from the Pseudomonas plasmid pVS1
(Heeb et al., 2000)"
CDS 4530..5594
/label="pVS1 RepA"
/note="replication protein from the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
rep_origin 5663..5857
/label="pVS1 oriV"
/note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid
pVS1 (Heeb et al., 2000)"
misc_feature 6201..6341
/label="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(6527..7115)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(7205..7996)
/label="KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"