pWB980-ori (pUC980-2) 质粒 (编号: V017497)

Note: pUC980-2 is a high-copy-number and highly stable E. coli-B. subtilis shuttle expression plasmid. It was constructed by inserting the E. coli replication origin (ori) upstream of the BA3-1 region in the pWB980-DB backbone. In B. subtilis, it maintains over 450 copies per cell with a segregational stability of up to 100%. It has been successfully used for the high-yield secretory production of heterologous proteins like alkaline pectate lyase (PelN) and alkaline protease (Spro1) in B. subtilis.

pWB980-ori (pUC980-2) is a shuttle plasmid with an additional replication origin compared to pWB980.

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基本信息

载体名称:: pWB980-ori (pUC980-2)

载体抗性:: Kanamycin

载体长度:: 4276 bp

载体类型:: Bacillus Expression vector

拷贝数:: High copy number

启动子:: P43

感受态:: DH10B

培养温度:: 37℃

产品信息

质粒编号:V017497

质粒名称:pWB980-ori (pUC980-2)

规格:5 μg (冻干粉)

下载资源

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

参考文献

Zhao X, Xu J, Tan M, Zhen J, Shu W, Yang S, Ma Y, Zheng H, Song H. High copy number and highly stable Escherichia coli-Bacillus subtilis shuttle plasmids based on pWB980. Microb Cell Fact. 2020 Feb 7;19(1):25. doi: 10.1186/s12934-020-1296-5. PMID: 32028973; PMCID: PMC7006159.