质粒编号
质粒名称
规格
价格
V014802
pTrp-GFA
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pTrp-GFA
- 载体抗性:
- Tetracycline
- 载体长度:
- 17509 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- E. coli
- 启动子:
- Tac
- 培养温度:
- 37℃
pTrp-GFA 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pTrp-GFA 载体序列
LOCUS V014802 17509 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Exported.
ACCESSION V014802
VERSION V014802
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 17509)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..17509
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 9..37
/label="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
CDS 174..1223
/gene="aroG"
/label="Phospho-2-dehydro-3-deoxyheptonate aldolase,
Phe-sensitive"
/note="Phospho-2-dehydro-3-deoxyheptonate aldolase,
Phe-sensitive from Escherichia coli (strain K12).
Accession#: P0AB91"
CDS 1227..2294
/gene="aroF"
/label="Phospho-2-dehydro-3-deoxyheptonate aldolase,
Tyr-sensitive"
/note="Phospho-2-dehydro-3-deoxyheptonate aldolase,
Tyr-sensitive from Escherichia coli (strain K12).
Accession#: P00888"
CDS 2298..4286
/gene="tktA"
/label="Transketolase 1"
/note="Transketolase 1 from Escherichia coli (strain K12).
Accession#: P27302"
CDS 4704..5933
/gene="serA"
/label="D-3-phosphoglycerate dehydrogenase"
/note="D-3-phosphoglycerate dehydrogenase from Escherichia
coli (strain K12). Accession#: P0A9T0"
promoter 6040..6068
/label="tet promoter"
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
CDS 6116..7303
/label="TcR"
/note="tetracycline efflux protein"
CDS 7945..8133
/label="rop"
/note="Rop protein, which maintains plasmids at low copy
number"
misc_feature 8238..8378
/label="bom"
/note="basis of mobility region from pBR322"
rep_origin complement(8564..9152)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 9299..9376
/label="lacI promoter"
promoter 10455..10483
/label="tac promoter"
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
protein_bind 10491..10507
/label="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 10515..10531
/label="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 10613..12172
/gene="trpE"
/label="Anthranilate synthase component 1"
/note="Anthranilate synthase component 1 from Escherichia
coli (strain K12). Accession#: P00895"
CDS 12175..13767
/gene="trpGD"
/label="Bifunctional protein TrpGD"
/note="Bifunctional protein TrpGD from Escherichia coli
(strain K12). Accession#: P00904"
CDS 13771..15129
/gene="trpC"
/label="Tryptophan biosynthesis protein TrpCF"
/note="Tryptophan biosynthesis protein TrpCF from
Escherichia coli (strain K12). Accession#: P00909"
CDS 15144..16334
/gene="trpB"
/label="Tryptophan synthase beta chain"
/note="Tryptophan synthase beta chain from Shigella
flexneri. Accession#: P0A880"
CDS 16337..17140
/gene="trpA"
/label="Tryptophan synthase alpha chain"
/note="Tryptophan synthase alpha chain from Escherichia
coli (strain K12). Accession#: P0A877"