质粒编号
质粒名称
规格
价格
V020203
pEnCMV-KRAS(human)-G12C-3xFLAG
100 μg (转染级)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:1 NT, 1 AA Mismatches
- 载体名称:
- pEnCMV-KRAS(human)-G12C-3xFLAG
- 载体抗性:
- Ampicillin
- Refseq ID:
- NM_004985.5
- 载体长度:
- 6564 bp
- 载体类型:
- Protein expression
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells
- 筛选标记:
- Neo/G418
- 启动子:
- CMV
- 载体标签:
- 3xFLAG
- 感受态:
- Stbl3
- 表达方法:
- Transient
- 描述:
- Homo sapiens KRAS proto-oncogene, GTPase (KRAS), transcript variant b, mRNA
pEnCMV-KRAS(human)-G12C-3xFLAG 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pEnCMV-KRAS(human)-G12C-3xFLAG 载体序列
LOCUS pEnCMV-KRAS(huma 6564 bp DNA circular SYN 28-JAN-2026
DEFINITION synthetic circular DNA
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6564)
AUTHORS DotmaticsRD
TITLE Direct Submission
COMMENT Sequence Label:
pEnCMV-KRAS(human)-G12C-3xFLAG
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6564
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 111..490
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 491..694
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 744..1307
/codon_start=1
/product="human small GTPase proto-oncoprotein"
/label=K-Ras
/translation="MTEYKLVVVGACGVGKSALTIQLIQNHFVDEYDPTIEDSYRKQVV
IDGETCLLDILDTAGQEEYSAMRDQYMRTGEGFLCVFAINNTKSFEDIHHYREQIKRVK
DSEDVPMVLVGNKCDLPSRTVDTKQAQDLARSYGIPFIETSAKTRQGVDDAFYTLVREI
RKHKEKMSKDGKKKKKKSKTKCVIM"
CDS 1314..1379
/codon_start=1
/product="three tandem FLAG(R) epitope tags, followed by an
enterokinase cleavage site"
/label=3xFLAG
/translation="DYKDHDGDYKDHDIDYKDDDDK"
misc_feature 1403..1991
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
CDS complement(1874..1885)
/codon_start=1
/product="Factor Xa recognition and cleavage site"
/label=Factor Xa site
/translation="IEGR"
polyA_signal 2057..2105
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 2307..2735
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2749..3078
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2929..3064
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 3145..3939
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin(R))"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 4113..4234
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(4283..4299)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 4307..4323
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(join(4331..4337,4338..4355,4356..4361))
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 4376..4397
/label=CAP binding site
/bound_moiety="E. coli catabolite activator protein"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(4685..5273)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(join(5444..6235,6236..6304))
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(6305..6409)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter