我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pSBFLPM
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5751 bp
载体类型:
Cloning vector
复制子:
pSC101 ori
载体来源:
Bowden SD, Palani NP, Libourel IG.
启动子:
araBAD

pSBFLPM 载体图谱

pSBFLPM5751 bp60012001800240030003600420048005400AmpR promoterAmpRfd terminatororiTpSC101 oriRep101FLPregulatoryaraBAD promoteraraC

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pSBFLPM 载体序列

LOCUS       40924_38803        5751 bp DNA     circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION  Cloning vector pSBFLPM, complete sequence.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5751)
  AUTHORS   Bowden SD, Palani NP, Libourel IG.
  TITLE     Stringent control of FLP recombinase in Escherichia coli
  JOURNAL   J. Microbiol. Methods 133, 52-54 (2016)
  PUBMED    28024983
REFERENCE   2  (bases 1 to 5751)
  AUTHORS   Bowden SD, Palani NP, Libourel IG.
  TITLE     Direct Submission
  JOURNAL   Submitted (13-DEC-2016) Biotechnology Institute, University of 
            Minnesota, 1500 Gortner Avenue, Saint Paul, MN 55108, USA
REFERENCE   3  (bases 1 to 5751)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   4  (bases 1 to 5751)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "J. 
            Microbiol. Methods 133, 52-54 (2016)"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted 
            (13-DEC-2016) Biotechnology Institute, University of Minnesota, 1500
            Gortner Avenue, Saint Paul, MN 55108, USA"
COMMENT     SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
COMMENT     ##Assembly-Data-START##
            Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing 
            ##Assembly-Data-END##
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5751
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        27..131
                     /label=AmpR promoter
     CDS             132..989
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     terminator      996..1035
                     /label=fd terminator
                     /note="central terminator from bacteriophage fd (Otsuka and
                     Kunisawa, 1982)"
     oriT            1182..1290
                     /label=oriT
                     /note="incP origin of transfer"
     rep_origin      1841..2063
                     /label=pSC101 ori
                     /note="low-copy replication origin that requires the Rep101
                     protein"
     CDS             2111..3058
                     /label=Rep101
                     /note="RepA protein needed for replication with the pSC101 
                     origin"
     CDS             complement(3256..4524)
                     /label=FLP
                     /note="site-specific recombinase"
     regulatory      complement(4531..4536)
                     /regulatory_class="ribosome_binding_site"
     promoter        complement(4552..4836)
                     /label=araBAD promoter
                     /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the
                     araC regulatory gene is transcribed in the opposite 
                     direction (Guzman et al., 1995)"
     CDS             4863..5738
                     /label=araC
                     /note="L-arabinose regulatory protein"