我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pSBFLPM
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5751 bp
- 载体类型:
- Cloning vector
- 复制子:
- pSC101 ori
- 载体来源:
- Bowden SD, Palani NP, Libourel IG.
- 启动子:
- araBAD
pSBFLPM 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pSBFLPM 载体序列
LOCUS 40924_38803 5751 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018 DEFINITION Cloning vector pSBFLPM, complete sequence. ACCESSION . VERSION . KEYWORDS . SOURCE synthetic DNA construct ORGANISM synthetic DNA construct REFERENCE 1 (bases 1 to 5751) AUTHORS Bowden SD, Palani NP, Libourel IG. TITLE Stringent control of FLP recombinase in Escherichia coli JOURNAL J. Microbiol. Methods 133, 52-54 (2016) PUBMED 28024983 REFERENCE 2 (bases 1 to 5751) AUTHORS Bowden SD, Palani NP, Libourel IG. TITLE Direct Submission JOURNAL Submitted (13-DEC-2016) Biotechnology Institute, University of Minnesota, 1500 Gortner Avenue, Saint Paul, MN 55108, USA REFERENCE 3 (bases 1 to 5751) TITLE Direct Submission REFERENCE 4 (bases 1 to 5751) AUTHORS . TITLE Direct Submission COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "J. Microbiol. Methods 133, 52-54 (2016)" COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted (13-DEC-2016) Biotechnology Institute, University of Minnesota, 1500 Gortner Avenue, Saint Paul, MN 55108, USA" COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article" COMMENT ##Assembly-Data-START## Sequencing Technology :: Sanger dideoxy sequencing ##Assembly-Data-END## FEATURES Location/Qualifiers source 1..5751 /mol_type="other DNA" /organism="synthetic DNA construct" promoter 27..131 /label=AmpR promoter CDS 132..989 /label=AmpR /note="beta-lactamase" terminator 996..1035 /label=fd terminator /note="central terminator from bacteriophage fd (Otsuka and Kunisawa, 1982)" oriT 1182..1290 /label=oriT /note="incP origin of transfer" rep_origin 1841..2063 /label=pSC101 ori /note="low-copy replication origin that requires the Rep101 protein" CDS 2111..3058 /label=Rep101 /note="RepA protein needed for replication with the pSC101 origin" CDS complement(3256..4524) /label=FLP /note="site-specific recombinase" regulatory complement(4531..4536) /regulatory_class="ribosome_binding_site" promoter complement(4552..4836) /label=araBAD promoter /note="promoter of the L-arabinose operon of E. coli; the araC regulatory gene is transcribed in the opposite direction (Guzman et al., 1995)" CDS 4863..5738 /label=araC /note="L-arabinose regulatory protein"