Note:
基本信息
- 载体名称:
- pAAV-hSyn-eNpHR 3.0-EYFP
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6242 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression, AAV
- 复制子:
- ori
- 拷贝数:
- High Copy
- 启动子:
- SYN1
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- ccacgcgaggcgcgagatag
- 3'引物:
- GCAATAGCATGATACAAAGG
产品信息
质粒编号:V007206
质粒名称:pAAV-hSyn-eNpHR 3.0-EYFP
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pAAV-hSyn-eNpHR 3.0-EYFP 质粒 (编号: V007206)序列
LOCUS 40924_3131 6242 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION AAV expression of eNpHR 3.0 fused to EYFP driven by humanized
Synapsin promoter for optogenetic inhibition.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6242)
TITLE eNpHR3.0-EYFP
REFERENCE 2 (bases 1 to 6242)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6242)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6242
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
repeat_region 52..181
/label=AAV2 ITR (alternate)
/note="Functional equivalent of wild-type AAV2 ITR"
promoter 226..673
/label=hSyn promoter
/note="human synapsin I promoter; confers neuron-specific
expression (Kugler et al., 2003)"
CDS 1652..2368
/codon_start=1
/label=EYFP
/note="enhanced YFP"
/translation="VVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTL
KFICTTGKLPVPWPTLVTTFGYGLQCFARYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDD
GNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYIMADKQKNGIK
VNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSYQSALSKDPNEKRDHMVLL
EFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature 2420..3008
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
polyA_signal 3040..3516
/label=hGH poly(A) signal
/note="human growth hormone polyadenylation signal"
repeat_region 3556..3696
/label=AAV2 ITR
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 3771..4226
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
primer_bind complement(4243..4262)
/label=pRS-marker
/note="pRS vectors, use to sequence yeast selectable
marker"
primer_bind 4362..4384
/label=pGEX 3'
/note="pGEX vectors, reverse primer"
primer_bind complement(4422..4440)
/label=pBRforEco
/note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
primer"
promoter 4508..4612
/label=AmpR promoter
CDS 4613..5470
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 5644..6232
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"