我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pKAR2-Br512
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6218 bp
- 载体类型:
- Bacterial Expression
- 复制子:
- ori
- 拷贝数:
- High Copy
- 启动子:
- T7, tetPA
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
- 5'引物:
- GCATCGTCTCATCGGTCTCATATGCACCATCATCACGGTCATC
- 3'引物:
- ATGCCGTCTCAGGTCTCAGGATCCTTATTACTTGGCGTCATACCAGGTG
pKAR2-Br512 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pKAR2-Br512 载体序列
LOCUS 40924_26551 6218 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Expresses Br512 polymerase in E.coli.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6218)
AUTHORS Maranhao A,Bhadra S, Paik I, Walker D, Ellington AD
TITLE An improved and readily available version of Bst DNA Polymerase for
LAMP, and applications to COVID-19 diagnostics
JOURNAL medRxiv
REFERENCE 2 (bases 1 to 6218)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6218)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "medRxiv"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6218
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
terminator 15..62
/label=T7 terminator
/note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
polymerase"
CDS complement(362..985)
/codon_start=1
/label=TetR
/note="tetracycline repressor TetR"
/translation="MMSRLDKSKVINSALELLNEVGIEGLTTRKLAQKLGVEQPTLYWH
VKNKRALLDALAIEMLDRHHTHFCPLEGESWQDFLRNNAKSFRCALLSHRDGAKVHLGT
RPTEKQYETLENQLAFLCQQGFSLENALYALSAVGHFTLGCVLEDQEHQVAKEERETPT
TDSMPPLLRQAIELFDHQGAEPAFLFGLELIICGLEKQLKCESGS"
CDS complement(1017..1874)
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(1875..1946)
/label=AmpR promoter
terminator 2023..2109
/label=rrnB T1 terminator
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
primer_bind complement(2253..2270)
/label=L4440
/note="L4440 vector, forward primer"
rep_origin complement(2424..3012)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
primer_bind 3822..3841
/label=Kan-R
/note="Kanamycin resistance gene, reverse primer"
primer_bind 3906..3925
/label=pENTR-R
/note="pENTR vectors, reverse primer"
primer_bind 4069..4087
/label=pBRforEco
/note="pBR322 vectors, upsteam of EcoRI site, forward
primer"
protein_bind 4108..4126
/label=tet operator
/note="bacterial operator O1 for the tetR and tetA genes"
promoter 4127..4145
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
protein_bind 4147..4165
/label=tet operator
/note="bacterial operator O2 for the tetR and tetA genes"
misc_RNA 4184..4234
/label=sTRSV HHRz
/note="hammerhead ribozyme from the tobacco ringspot virus
satellite RNA (Khvorova et al., 2003)"
RBS 4268..4276
/label=Shine-Dalgarno sequence
/note="full consensus sequence for ribosome-binding sites
upstream of start codons in E. coli; complementary to a
region in the 3' end of the 16S rRNA (Chen et al., 1994)"