我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pCold IV
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4359 bp
- 载体类型:
- Expression vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Qing G, Ma LC, Khorchid A, Swapna GV, Mal TK, Takayama MM, Xia B, Phadtare S, Ke H, Acton T, Montelione GT, Ikura M, Inouye M.
- 启动子:
- cspA
pCold IV 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCold IV 载体序列
LOCUS 40924_12695 4359 bp DNA circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION Expression vector pColdIV DNA, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4359)
AUTHORS Qing G, Ma LC, Khorchid A, Swapna GV, Mal TK, Takayama MM, Xia B,
Phadtare S, Ke H, Acton T, Montelione GT, Ikura M, Inouye M.
TITLE Cold-shock induced high-yield protein production in Escherichia coli
JOURNAL Nat. Biotechnol. 22 (7), 877-882 (2004)
PUBMED 15195104
REFERENCE 2 (bases 1 to 4359)
AUTHORS Takayama MM, Inouye M.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (04-AUG-2004) Masanori Mitta Takayama, UMDNJ-Robert Wood
Johnson Medical School, Department of Biochemistry; 675 Hoes Lane,
Piscataway, NJ 08854-5635, USA (E-mail:mitsutam@takara-bio.co.jp,
Tel:81-77-543-7200, Fax:81-77-543-2494)
REFERENCE 3 (bases 1 to 4359)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 4359)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nat.
Biotechnol."; date: "2004"; volume: "22"; issue: "7"; pages:
"877-882"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(04-AUG-2004) Masanori Mitta Takayama, UMDNJ-Robert Wood Johnson
Medical School, Department of Biochemistry"; volume: " 675 Hoes
Lane, Piscataway, NJ 08854-5635, USA
(E-mail:mitsutam@takara-bio.co.jp, Tel:81-77-543-7200, Fax"; pages:
"81-77-543-2494"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4359
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 15..81
/label=cspA promoter
/note="promoter of the E. coli cold shock protein cspA gene
(Mitta et al., 1997)"
protein_bind 84..100
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
5'UTR 122..252
/label=cspA 5'UTR
/note="5'UTR of the E. coli cold shock protein cspA gene
(Mitta et al., 1997)"
misc_feature 253..312
/gene="cspA"
/note="MCS = Multiple cloning sites contain the follow
restriction sites: NdeI, SacI, KpnI, XhoI, BamHI, EcoRI,
HindIII, SalI, PstI, XbaI"
3'UTR 320..464
/label=cspA 3'UTR
/note="3'UTR of the E. coli cold shock protein cspA gene
(Mitta et al., 1997)"
rep_origin complement(663..1118)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1218..1322
/label=AmpR promoter
CDS 1323..2180
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
rep_origin 2354..2942
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind complement(3080..3101)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
CDS complement(3117..4196)
/label=lacI
/note="lac repressor"
promoter complement(4197..4274)
/label=lacI promoter