Note:
基本信息
- 载体名称:
- pCN42
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 7297 bp
- 载体类型:
- Staphylococcal shuttle vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Riojas MA, Bojja K, Byrd R, Hamid S, Mooney S, Monaco A, Alalade R, King S, Hazbon MH.
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCN42 质粒 (编号: V008339)序列
LOCUS V008339 7297 bp DNA circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION Exported.
ACCESSION V008339
VERSION V008339
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 7297)
AUTHORS Riojas MA, Bojja K, Byrd R, Hamid S, Mooney S, Monaco A, Alalade R,
King S, Hazbon MH.
TITLE Sequencing of a set of cassette-based shuttle vectors for
Gram-positive bacteria deposited at BEI resources from the NARSA
collection
JOURNAL Unpublished
REFERENCE 2 (bases 1 to 7297)
AUTHORS Riojas MA, Bojja K, Byrd R, Hamid S, Mooney S, Monaco A, Alalade R,
King S, Hazbon MH.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (14-MAY-2015) BEI Bacteriology, BEI Resources/American
Type and Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard,
Manassas, VA 20110-2209, USA
REFERENCE 3 (bases 1 to 7297)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 7297)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT ##Assembly-Data-START##
Assembly Method :: CLC Genomics Workbench v. 7.0.2
Coverage :: 32653
Sequencing Technology :: Illumina
##Assembly-Data-END##
SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName:
"Unpublished"
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(14-MAY-2015) BEI Bacteriology, BEI Resources/American Type and
Culture Collection (ATCC), 10801 University Boulevard, Manassas, VA
20110-2209, USA"
SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7297
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 1..2089
/note="T181copwt repC; Staphylococcus replication cassette;
derived from J04764"
misc_feature 159..392
/label="RS-B site"
/note="RS-B site"
rep_origin 656..823
/note="ori; derived from Staphylococcus aureus"
CDS 688..1632
/codon_start=1
/product="RepC protein"
/label="RepC protein"
/note="polypeptide A"
/protein_id="AMR43726.1"
/translation="MYKNNHANHSNHLENHDLDNFSKTGYSNSRLDAHTVCISDPKLSF
DAMTIVGNLNRDNAQALSKFMSVEPQIRLWDILQTKFKAKALQEKVYIEYDKVKADSWD
RRNMRIEFNPNKLTRDEMIWLKQNIISYMEDDGFTRLDLAFDFEDDLSDYYAMSDKAVK
KTIFYGRNGKPETKYFGVRDSNRFIRIYNKKQERKDNADAEVMSEHLWRVEIELKRDMV
DYWNDCFSDLHILQPDWKTIQRTADRAIVFMLLSDEEEWGKLHRNSRTKYKNLIKEISP
VDLTDLMKSTLKANEKQLQKQIDFWQHEFKFWK"
variation 1132..1134
/label="E149D"
/note="E149D"
misc_feature 1794..2089
/label="truncated polypeptide B"
/note="truncated polypeptide B"
misc_feature 2408..2467
/label="leader peptide"
/note="leader peptide"
CDS 2527..3258
/gene="ermC"
/label="rRNA adenine N-6-methyltransferase"
/note="rRNA adenine N-6-methyltransferase from
Staphylococcus aureus. Accession#: P02979"
promoter 3626..3730
/label="AmpR promoter"
CDS 3731..4588
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
rep_origin 4762..5350
/direction=RIGHT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 5702..6067
/gene="cadC"
/label="Cadmium resistance transcriptional regulatory
protein CadC"
/note="Cadmium resistance transcriptional regulatory
protein CadC from Staphylococcus aureus. Accession#:
P20047"
misc_feature 6073..6117
/note="polylinker; derived from M13mp19"
CDS 6147..6989
/gene="blaZ"
/label="Beta-lactamase"
/note="Beta-lactamase from Staphylococcus aureus.
Accession#: P00807"
misc_feature 7156..7293
/label="TT"
/note="TT"