质粒编号
质粒名称
规格
价格
V012542
pY004 (pcDNA3.1-hFnCpf1)
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:
- 载体名称:
- pY004 (pcDNA3.1-hFnCpf1)
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 9446 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression, CRISPR
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- Neomycin (select with G418)
- 启动子:
- SV40
- 5'引物:
- CMV-F
- 3'引物:
- BGH-rev
pY004 (pcDNA3.1-hFnCpf1) 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pY004 (pcDNA3.1-hFnCpf1) 载体序列
LOCUS V012542 9446 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Exported.
ACCESSION V012542
VERSION V012542
KEYWORDS pY004 (pcDNA3.1-hFnCpf1)
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 9446)
AUTHORS Zetsche B, Gootenberg JS, Abudayyeh OO, Slaymaker IM, Makarova KS,
Essletzbichler P, Volz SE, Joung J, van der Oost J, Regev A, Koonin
EV, Zhang F
TITLE Cpf1 Is a Single RNA-Guided Endonuclease of a Class 2 CRISPR-Cas
System.
JOURNAL Cell. 2015 Sep 23. pii: S0092-8674(15)01200-3. doi:
10.1016/j.cell.2015.09.038.
PUBMED 26422227
REFERENCE 2 (bases 1 to 9446)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 9446)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Cell. 2015
Sep 23. pii: S0092-8674(15)01200-3. doi:
10.1016/j.cell.2015.09.038."
SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9446
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind complement(44..63)
/label="pRS-marker"
/note="pRS vectors, use to sequence yeast selectable
marker"
enhancer 235..614
/label="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 929..4828
/gene="cas12a"
/label="CRISPR-associated endonuclease Cas12a"
/note="CRISPR-associated endonuclease Cas12a from
Francisella tularensis subsp. novicida (strain U112).
Accession#: A0Q7Q2"
CDS 4829..4876
/label="nucleoplasmin NLS"
/note="bipartite nuclear localization signal from
nucleoplasmin"
CDS 4883..4963
/label="3xHA"
/note="three tandem HA epitope tags"
polyA_signal 5043..5267
/label="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 5313..5741
/label="f1 ori"
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5755..6084
/label="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 6151..6942
/label="NeoR/KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
polyA_signal 7119..7252
/label="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(7289..7305)
/label="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind complement(7313..7329)
/label="lac operator"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(7337..7367)
/label="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind complement(7382..7403)
/label="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
primer_bind complement(7520..7537)
/label="L4440"
/note="L4440 vector, forward primer"
rep_origin complement(7691..8279)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(8453..9310)
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
promoter complement(9311..9415)
/label="AmpR promoter"