我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pAAV9(5)-CMV-EGFP-CytB-AS-ohneNot
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 7187 bp
- 载体类型:
- SiRNA vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Michel U, Malik I, Ebert S, Bahr M, Kugler S.
- 启动子:
- mCMV
pAAV9(5)-CMV-EGFP-CytB-AS-ohneNot 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pAAV9(5)-CMV-EGFP-CytB-AS-ohneNot 载体序列
LOCUS 40924_3266 7187 bp DNA circular SYN 17-DEC-2018
DEFINITION SiRNA vector pAAV9(5)-CMV-EGFP-CytB-AS-ohneNot, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7187)
AUTHORS Michel U, Malik I, Ebert S, Bahr M, Kugler S.
TITLE Long-term in vivo and in vitro AAV-2-mediated RNA interference in
rat retinal ganglion cells and cultured primary neurons
JOURNAL Biochem. Biophys. Res. Commun. 326 (2), 307-312 (2005)
PUBMED 15582578
REFERENCE 2 (bases 1 to 7187)
AUTHORS Michel U, Malik I, Kuegler S.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (01-JUN-2004) Neurology, University of Goettingen, Waldweg
33, Goettingen 37073, Germany
REFERENCE 3 (bases 1 to 7187)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 4 (bases 1 to 7187)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Biochem.
Biophys. Res. Commun."; date: "2005"; volume: "326"; issue: "2";
pages: "307-312"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(01-JUN-2004) Neurology, University of Goettingen, Waldweg 33,
Goettingen 37073, Germany"
COMMENT SGRef: number: 3; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7187
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
repeat_region 1..141
/label=AAV2 ITR
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
polyA_signal complement(194..328)
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
intron complement(344..477)
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
CDS complement(492..1208)
/label=EGFP
/note="enhanced GFP"
misc_feature complement(1227..1246)
/note="MCS; multiple cloning site"
promoter complement(1249..1777)
/label=mCMV promoter
/note="mouse cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
primer_bind 1779..1795
/label=SK primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 1815..2029
/label=H1 promoter
/note="human H1 RNA promoter"
misc_feature 2031..2162
/note="Cytb-AS; partial human cytochrome B antisense
sequence"
gene complement(2167..4430)
/gene="9(5)"
/label=9(5)
/note="partial sequence from the non-coding porcine RNA UM
9(5)"
repeat_region 4450..4590
/label=AAV2 ITR
/note="inverted terminal repeat of adeno-associated virus
serotype 2"
rep_origin 4665..5120
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 5402..5506
/label=AmpR promoter
CDS 5507..6364
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
rep_origin 6538..7126
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"