质粒编号
质粒名称
规格
价格
V012825
pENTER
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:Adenoviral pENTER shuttle vector with kanamycin selection and CMV promoter and C-terminal FLAG and His tags.
- 载体名称:
- pENTER
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 7509 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression Vectors
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- Puromycin
- 启动子:
- CMV
- 克隆方法:
- Enzyme Cut
- 5'引物:
- T7 promoter
- 3'引物:
- pOT-R
- 载体标签:
- FLAG/His
- 表达方法:
- Constiutive, Stable / Transient
pENTER 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pENTER 载体序列
LOCUS V012825 7509 bp DNA circular SYN 04-NOV-2023
DEFINITION Exported.
ACCESSION V012825
VERSION V012825
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 7509)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7509
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
repeat_region 21..123
/label="ITR"
/note="inverted terminal repeat of human adenovirus
serotype 5"
misc_signal 211..361
/label="Ad5 Psi"
/note="packaging signal for adenovirus serotype 5"
enhancer 419..722
/label="CMV enhancer"
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 723..926
/label="CMV promoter"
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 954..972
/label="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
CDS 1073..1096
/label="FLAG"
/note="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
CDS 1106..1123
/label="6xHis"
/note="6xHis affinity tag"
polyA_signal 1294..1415
/label="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
CDS 1509..1928
/gene="IX"
/label="Hexon-interlacing protein"
/note="Hexon-interlacing protein from Human adenovirus C
serotype 5. Accession#: P03281"
promoter 2342..2671
/label="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2729..3325
/label="PuroR"
/note="puromycin N-acetyltransferase"
polyA_signal 3329..3553
/label="bGH poly(A) signal"
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
CDS complement(3771..4154)
/note="Early 4 ORF1 protein from Human adenovirus C
serotype 2. Accession#: P03242"
/label="Early 4 ORF1 protein"
repeat_region 4464..4566
/label="ITR"
/note="inverted terminal repeat of human adenovirus
serotype 5"
rep_origin complement(4838..5426)
/direction=LEFT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS 6258..7049
/label="NeoR/KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
rep_origin complement(7100..7480)
/direction=LEFT
/label="M13 ori"
/note="M13 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"