质粒编号
质粒名称
规格
价格
V012813
pAIDA1
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
Note:A construct with the AIDA surface expression system for display of a passenger protein flanked by His and Myc tags
- 载体名称:
- pAIDA1
- 载体抗性:
- Chloramphenicol
- 载体长度:
- 5561 bp
- 载体类型:
- E.coli expression plasmid
- 复制子:
- p15A ori
- 载体来源:
- Gen Larsson
- 拷贝数:
- Low copy number
- 启动子:
- lacUV5
- 克隆方法:
- Enzyme Cut
- 5'引物:
- GAGCGGATAACAATTTCACACAGG
- 感受态:
- DH5alpha
- 培养温度:
- 37℃
pAIDA1 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pAIDA1 载体序列
LOCUS pAIDA1. 5561 bp DNA circular SYN 11-MAY-2023
DEFINITION A construct with the AIDA surface expression system for display of a
passenger protein flanked by His and Myc tags.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pAIDA1
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5561)
AUTHORS Jarmander J, Gustavsson M, Do TH, Samuelson P, Larsson G
TITLE A dual tag system for facilitated detection of surface expressed
proteins in Escherichia coli.
JOURNAL Microb Cell Fact. 2012 Sep 3;11:118. doi: 10.1186/1475-2859-11-118.
PUBMED 22943700
REFERENCE 2 (bases 1 to 5561)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Microb Cell
Fact."; date: "2012-09-3"; volume: "11:118. doi"; pages: "
10.1186/1475-2859-11-118"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5561
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 1..31
/label=lac UV5 promoter
/note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation"
protein_bind 39..55
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 77..229
/codon_start=1
/label=SP
/note="SP"
/translation="MNKAYSIIWSHSRQAWIVASELARGHGFVLAKNTLLVLAVVSTIG
NAFAVD"
CDS 230..247
/label=6xHis
/note="6xHis affinity tag"
CDS 248..271
/codon_start=1
/label=HRV3C
/note="HRV3C"
/translation="LEALFQGP"
CDS 299..319
/label=TEV site
/note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
CDS 320..349
/label=Myc
/note="Myc (human c-Myc proto-oncogene) epitope tag"
CDS 356..1849
/codon_start=1
/label=ADIA
/note="ADIA"
/translation="VNNNGSIVINNSIINGNITNDADLSFGTAKLLSATVNGSLVNNKN
IILNPTKESAAAIGNTLTVSNYTGTPGSVISLGGVLEGDNSLTDRLVVKGNTSGQSDIV
YVNEDGSGGQTRDGINIISVEGNSDAEFSLKNRVVAGAYDYTLQKGNESGTDNKGWYLT
SHLPTSDTRQYRPENGSYATNMALANSLFLMDLNERKQFRAMSDNTQPESASVWMKITG
GISSGKLNDGQNKTTTNQFINQLGGDIYKFHAEQLGDFTLGIMGGYANAKGKTINYTSN
KAARNTLDGYSVGVYGTWYQNGENATGLFAETWMQYNWFNASVKGDGLEEEKYNLNGLT
ASAGGGYNLNVHTWTSPEGITGEFWLQPHLQAVWMGVTPDTHQEDNGTVVQGAGKNNIQ
TKAGIRASWKVKSTLDKDTGRRFRPYIEANWIHNTHEFGVKMSDDSQLLSGSRNQGEIK
TGIEGVITQNLSVNGGVAYQAGGHGSNAISGALGIKYSF"
rep_origin 2344..2889
/label=p15A ori
/note="Plasmids containing the medium-copy-number p15A
origin of replication can be propagated in E. coli cells
that contain a second plasmid with the ColE1 origin."
primer_bind 3006..3023
/label=L4440
/note="L4440 vector, forward primer"
primer_bind complement(3473..3492)
/label=pENTR-R
/note="pENTR vectors, reverse primer"
CDS 3659..4315
/label=CmR
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
promoter 4331..4408
/label=lacI promoter
CDS 4409..5488
/label=lacI
/note="lac repressor"