pwtCas9-bacteria 载体 (V012764) GenBank图谱(.gb)

质粒编号

质粒名称

规格

价格

V012764

pwtCas9-bacteria

5 μg (冻干粉)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

Note: aTc-inducible expression of wild-type Cas9 (S .pyogenes) for bacterial gene knockdown

载体名称:: pwtCas9-bacteria

载体抗性:: Ampicillin

载体长度:: 6932 bp

载体类型:: CRISPR Plasmids

复制子:: ori

载体来源:: Stanley Qi

拷贝数:: High copy number

启动子:: tetR/tetAs

表达方法:: aTc-inducible

pwtCas9-bacteria 载体图谱

复制序列 NovoBuilder中查看图谱

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pwtCas9-bacteria 载体序列

LOCUS       pwtCas9-bacteria        6932 bp DNA     circular SYN 18-SEP-2021
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pwtCas9-bacteria
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 6932)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 6932)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6932
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     CDS             complement(10..633)
                     /label=TetR
                     /note="tetracycline repressor TetR"
     promoter        649..704
                     /label=tetR/tetA promoters
                     /note="overlapping promoters for bacterial tetR and tetA"
     RBS             722..733
                     /note="strong bacterial ribosome binding site (Elowitz and 
                     Leibler, 2000)"
     CDS             740..4843
                     /label=Cas9
                     /note="Cas9 (Csn1) endonuclease from the Streptococcus
                     pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
     terminator      4870..4941
                     /label=rrnB T1 terminator
                     /note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
                     gene"
     terminator      4957..4984
                     /label=T7Te terminator
                     /note="phage T7 early transcription terminator"
     rep_origin      complement(5151..5739)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     terminator      complement(5827..5921)
                     /label=lambda t0 terminator
                     /note="transcription terminator from phage lambda"
     CDS             complement(5954..6811)
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
     promoter        complement(6812..6916)
                     /label=AmpR promoter