Note:
基本信息
- 载体名称:
- GST-HA-GFP11-N1
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 4759 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression
- 复制子:
- ori
- 筛选标记:
- Kan/Neo
- 拷贝数:
- High Copy
- 启动子:
- CMV
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
产品信息
质粒编号:V000169
质粒名称:GST-HA-GFP11-N1
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
GST-HA-GFP11-N1 质粒 (编号: V000169)序列
LOCUS 40924_1239 4759 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION Expresses GST-HA-GFP11 in mammalian cells.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4759)
AUTHORS Ruan L, Zhou C, Jin E, Kucharavy A, Zhang Y, Wen Z, Florens L, Li R
TITLE Cytosolic proteostasis through importing of misfolded proteins into
mitochondria.
JOURNAL Nature. 2017 Mar 16;543(7645):443-446. doi: 10.1038/nature21695.
Epub 2017 Mar 1.
PUBMED 28241148
REFERENCE 2 (bases 1 to 4759)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 4759)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; doi:
"10.1038/nature21695"; journalName: "Nature"; date: "2017-03-16-
16"; volume: "543"; issue: "7645"; pages: "443-446"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4759
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 124..427
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 428..631
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
CDS 691..1344
/codon_start=1
/label=GST
/note="glutathione S-transferase from Schistosoma
japonicum"
/translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
CDS 1372..1398
/codon_start=1
/label=HA
/note="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/translation="YPYDVPDYA"
CDS 1438..1485
/codon_start=1
/label=GFP11
/note="11th beta-strand of superfolder GFP"
/translation="RDHMVLHEYVNAAGIT"
polyA_signal 1610..1731
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1738..2193)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2220..2324
/label=AmpR promoter
promoter 2326..2683
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2718..3509
/codon_start=1
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKASMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
primer_bind complement(3700..3719)
/label=TK-pA-R
/note="Thymidine kinase polyA, reverse primer"
polyA_signal 3744..3791
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 4120..4708
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"