pMIND 载体 (V000961) GenBank图谱(.gb)

质粒编号

质粒名称

规格

价格

V000961

pMIND

5 μg (冻干粉)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供学术研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

Note:

载体名称:: pMIND

载体抗性:: Kanamycin

载体长度:: 6778 bp

载体类型:: Bacterial Expression

复制子:: ori

筛选标记:: Hygromycin

拷贝数:: Low Copy

克隆方法:: Restriction Enzyme

pMIND 载体图谱

复制序列 NovoBuilder中查看图谱

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pMIND 载体序列

LOCUS       V000961                 6778 bp    DNA     circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V000961
VERSION     V000961
KEYWORDS    pMIND
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 6778)
  AUTHORS   Blokpoel MC, Murphy HN, O'Toole R, Wiles S, Runn ES, Stewart GR,
            Young DB, Robertson BD
  TITLE     Tetracycline-inducible gene regulation in mycobacteria.
  JOURNAL   Nucleic Acids Res. 2005  . 33(2):e22.
   PUBMED   15687380
REFERENCE   2  (bases 1 to 6778)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   3  (bases 1 to 6778)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nucleic
            Acids Res. 2005  . 33(2):e22."
            SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..6778
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     primer_bind     19..35
                     /label="M13 rev"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     CDS             908..1903
                     /gene="hyg"
                     /label="Hygromycin-B 7''-O-kinase"
                     /note="Hygromycin-B 7''-O-kinase from Streptomyces
                     hygroscopicus. Accession#: P09979"
     primer_bind     complement(1916..1932)
                     /label="M13 fwd"
                     /note="common sequencing primer, one of multiple similar
                     variants"
     CDS             4745..5536
                     /label="NeoR/KanR"
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     rep_origin      5823..6411
                     /label="ori"
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
                     replication"
     primer_bind     6565..6582
                     /label="L4440"
                     /note="L4440 vector, forward primer"
     protein_bind    6699..6720
                     /label="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     promoter        6735..6765
                     /label="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"