pFastBac1-GST-N 载体 (V001173)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pFastBac1-GST-N
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5473 bp
载体类型:
Insect Cell Expression Vectors
复制子:
ori
筛选标记:
Gentamicin
启动子:
polyhedrin
5'引物:
pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC
3'引物:
pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA

pFastBac1-GST-N 载体图谱

pFastBac1-GST-N5473 bp60012001800240030003600420048005400f1 oriAmpR promoterAmpRoriTn7RGmRPc promoterpolyhedrin promoterGSTTEV siteSV40 poly(A) signalTn7L

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pFastBac1-GST-N 载体序列

LOCUS       40924_19731        5473 bp DNA     circular SYN 13-JAN-2022
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5473)
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   2  (bases 1 to 5473)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5473
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     rep_origin      2..457
                     /label=f1 ori
                     /note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
                     indicates direction of (+) strand synthesis"
     promoter        484..588
                     /label=AmpR promoter
     CDS             589..1446
                     /codon_start=1
                     /label=AmpR
                     /note="beta-lactamase"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1620..2208
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     mobile_element  complement(2511..2735)
                     /label=Tn7R
                     /note="mini-Tn7 element (right end of the Tn7 transposon)"
     CDS             complement(2805..3335)
                     /codon_start=1
                     /label=GmR
                     /note="gentamycin acetyltransferase"
                     /translation="MLRSSNDVTQQGSRPKTKLGGSSMGIIRTCRLGPDQVKSMRAALD
                     LFGREFGDVATYSQHQPDSDYLGNLLRSKTFIALAAFDQEAVVGALAAYVLPRFEQPRS
                     EIYIYDLAVSGEHRRQGIATALINLLKHEANALGAYVIYVQADYGDDPAVALYTKLGIR
                     EEVMHFDIDPSTAT"
     promoter        complement(3524..3552)
                     /label=Pc promoter
                     /note="class 1 integron promoter"
     promoter        3904..3995
                     /label=polyhedrin promoter
                     /note="promoter for the baculovirus polyhedrin gene"
     CDS             4038..4691
                     /codon_start=1
                     /label=GST
                     /note="glutathione S-transferase from Schistosoma
                     japonicum"
                     /translation="MSPILGYWKIKGLVQPTRLLLEYLEEKYEEHLYERDEGDKWRNKK
                     FELGLEFPNLPYYIDGDVKLTQSMAIIRYIADKHNMLGGCPKERAEISMLEGAVLDIRY
                     GVSRIAYSKDFETLKVDFLSKLPEMLKMFEDRLCHKTYLNGDHVTHPDFMLYDALDVVL
                     YMDPMCLDAFPKLVCFKKRIEAIPQIDKYLKSSKYIAWPLQGWQATFGGGDHPPK"
     CDS             4704..4724
                     /codon_start=1
                     /label=TEV site
                     /note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and 
                     cleavage site"
                     /translation="ENLYFQS"
     polyA_signal    4963..5097
                     /label=SV40 poly(A) signal
                     /note="SV40 polyadenylation signal"
     mobile_element  complement(5126..5291)
                     /label=Tn7L
                     /note="mini-Tn7 element (left end of the Tn7 transposon)"