质粒编号
质粒名称
规格
价格
V010744
pUC18R6KT-mini-Tn7T-Km
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pUC18R6KT-mini-Tn7T-Km
- 载体抗性:
- Ampicillin, Kanamycin
- 载体长度:
- 4911 bp
- 载体类型:
- Bacterial Expression
- 复制子:
- R6K γ ori
- 克隆方法:
- Restriction Enzyme
pUC18R6KT-mini-Tn7T-Km 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pUC18R6KT-mini-Tn7T-Km 载体序列
LOCUS 40924_45043 4911 bp DNA circular SYN 13-MAY-2021
DEFINITION mini-Tn7 base vector with transcriptional terminator and oriT.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4911)
AUTHORS Choi KH, Gaynor JB, White KG, Lopez C, Bosio CM, Karkhoff-Schweizer
RR, Schweizer HP
TITLE A Tn7-based broad-range bacterial cloning and expression system.
JOURNAL Nat Methods. 2005 Jun;2(6):443-8.
PUBMED 15908923
REFERENCE 2 (bases 1 to 4911)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 4911)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nat
Methods."; date: "2005-06"; volume: "2(6)"; pages: "443-8"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4911
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
mobile_element 369..534
/label=Tn7L
/note="mini-Tn7 element (left end of the Tn7 transposon)"
CDS 1083..1874
/codon_start=1
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
protein_bind complement(1985..2032)
/label=FRT
/note="FLP-mediated recombination occurs in the 8-bp core
sequence TCTAGAAA (Turan and Bode, 2011)."
terminator complement(2080..2166)
/label=rrnB T1 terminator
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
terminator complement(2269..2363)
/label=lambda t0 terminator
/note="transcription terminator from phage lambda"
primer_bind complement(2391..2407)
/label=KS primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 3087..3191
/label=AmpR promoter
CDS 3192..4049
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin complement(4461..4845)
/direction=LEFT
/label=R6K gamma ori
/note="gamma replication origin from E. coli plasmid R6K;
requires the R6K initiator protein pi for replication"
oriT complement(join(4868..4911,1..65))
/direction=LEFT
/label=oriT
/note="incP origin of transfer"