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pSL1521 (pSPIN, pSC101* backbone) 载体 (V017531)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pSL1521 (pSPIN, pSC101* backbone)
载体抗性:
Spectinomycin
载体长度:
12724 bp
载体类型:
Protein expression
复制子:
pSC101 ori
宿主:
Bacteria
启动子:
J23119
5'引物:
T7ter
感受态:
DH5a
培养温度:
30℃

pSL1521 (pSPIN, pSC101* backbone) 载体图谱

pSL1521 (pSPIN, pSC101* backbone)12724 bp6001200180024003000360042004800540060006600720078008400900096001020010800114001200012600AmpR promoterSmRJ23119 promoterFactor Xa siteT7 terminatorCmRpSC101 oriRep101(Ts)

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pSL1521 (pSPIN, pSC101* backbone) 载体序列

LOCUS       .                      12724 bp    DNA     circular UNK 01-JAN-1980
DEFINITION  synthetic circular DNA.
ACCESSION   
VERSION     
KEYWORDS    .
SOURCE      .
  ORGANISM  .
            .
FEATURES             Location/Qualifiers
     promoter        241..332
                     /label="AmpR promoter"
     CDS             333..1121
                     /label="SmR"
                     /note="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 1985)"
     promoter        1310..1344
                     /label="J23119 promoter"
                     /note="bacterial promoter (Registry of Standard Biological
                     Parts BBa_J23119)"
     CDS             8326..8337
                     /label="Factor Xa site"
                     /note="Factor Xa recognition and cleavage site"
     terminator      9786..9833
                     /label="T7 terminator"
                     /note="transcription terminator for bacteriophage T7 RNA
                     polymerase"
     CDS             9988..10644
                     /label="CmR"
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
     rep_origin      11470..11692
                     /label="pSC101 ori"
                     /note="low-copy replication origin that requires the Rep101
                     protein"
     CDS             11740..12687
                     /label="Rep101(Ts)"
                     /note="temperature-sensitive version of the RepA protein
                     needed for replication with the pSC101 origin (Armstrong et
                     al., 1984)"