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pULTRA-CNF 载体 (V017396)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pULTRA-CNF
载体抗性:
Streptomycin
载体长度:
4977 bp
载体类型:
Protein expression
复制子:
CloDF13 ori
宿主:
E. coli
启动子:
tac
培养温度:
37℃

pULTRA-CNF 载体图谱

pULTRA-CNF4977 bp6001200180024003000360042004800tac promoterlac operatorTyrosine--tRNA ligaseSmRAmpR promoterCloDF13 oriCAP binding sitelacIlacI promoter

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pULTRA-CNF 载体序列

LOCUS       V017396                 4977 bp    DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V017396
VERSION     V017396
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 4977)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..4977
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        11..39
                     /label="tac promoter"
                     /note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
                     lac UV5 promoters"
     protein_bind    47..63
                     /label="lac operator"
                     /note="The lac repressor binds to the lac operator to
                     inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
                     relieved by adding lactose or
                     isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
     CDS             87..1004
                     /gene="tyrS"
                     /label="Tyrosine--tRNA ligase"
                     /note="Tyrosine--tRNA ligase from Methanocaldococcus
                     jannaschii (strain ATCC 43067 / DSM 2661 / JAL-1 / JCM
                     10045 / NBRC 100440). Accession#: Q57834"
     CDS             complement(1904..2692)
                     /label="SmR"
                     /note="aminoglycoside adenylyltransferase (Murphy, 1985)"
     promoter        complement(2693..2784)
                     /label="AmpR promoter"
     rep_origin      complement(2832..3570)
                     /direction=LEFT
                     /label="CloDF13 ori"
                     /note="Plasmids containing the CloDF13 (CDF) origin of
                     replication can be propagated in E. coli cells that contain
                     additional plasmids with compatible origins."
     protein_bind    complement(3746..3767)
                     /label="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     CDS             complement(3783..4862)
                     /label="lacI"
                     /note="lac repressor"
     promoter        complement(4863..4940)
                     /label="lacI promoter"