质粒编号
质粒名称
规格
价格
V017374
pEG BacMam
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pEG BacMam plasmid is a mammalian expression vector optimized for structural biology studies of membrane proteins. Key features include: BacMam system: Enables high-yield protein production in mammalian cells via baculovirus transduction; EGFP fusion: C-terminal EGFP tag facilitates expression monitoring and purification; Mammalian promoters: CMV/T7 promoters drive robust expression in HEK293 or insect cells; Affinity tags: Optional His-tag or Strep-tag II for protein purification.
- 载体名称:
- pEG BacMam
- 载体抗性:
- Gentamycin
- 载体长度:
- 6893 bp
- 复制子:
- ori
- 启动子:
- CMV
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
pEG BacMam 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pEG BacMam 载体序列
LOCUS 62056_8915 6893 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6893)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6893
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 3..206
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 342..474
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
misc_feature 607..1195
/label=WPRE
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
polyA_signal 1328..1462
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
mobile_element complement(1491..1656)
/label=Tn7L
/note="mini-Tn7 element (left end of the Tn7 transposon)"
rep_origin 1840..2294
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 2320..2424
/label=AmpR promoter
CDS 2425..3282
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 3456..4044
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
mobile_element complement(4349..4573)
/label=Tn7R
/note="mini-Tn7 element (right end of the Tn7 transposon)"
CDS complement(4643..5173)
/codon_start=1
/label=GmR
/note="gentamycin acetyltransferase"
/translation="MLRSSNDVTQQGSRPKTKLGGSSMGIIRTCRLGPDQVKSMRAALD
LFGREFGDVATYSQHQPDSDYLGNLLRSKTFIALAAFDQEAVVGALAAYVLPKFEQPRS
EIYIYDLAVSGEHRRQGIATALINLLKHEANALGAYVIYVQADYGDDPAVALYTKLGIR
EEVMHFDIDPSTAT"
promoter complement(5362..5390)
/label=Pc promoter
/note="class 1 integron promoter"
polyA_signal complement(5907..5955)
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
promoter complement(6091..6200)
/label=p10 promoter
/note="baculovirus promoter for expression in insect cells"
promoter 6245..6336
/label=polyhedrin promoter
/note="promoter for the baculovirus polyhedrin gene"
enhancer 6517..6893
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"