我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pNRVL-LEU2-GFP
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 7445 bp
- 载体类型:
- Expression vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Nemeth T.
pNRVL-LEU2-GFP 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pNRVL-LEU2-GFP 载体序列
LOCUS V015897 7445 bp DNA circular SYN 03-MAR-2020
DEFINITION Exported.
ACCESSION V015897
VERSION V015897
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 7445)
AUTHORS Nemeth T.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (28-JAN-2020) Department of Microbiology, University of
Szeged, Kozep fasor 52, Szeged, Csongrad 6726, Hungary
REFERENCE 2 (bases 1 to 7445)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT ##Assembly-Data-START##
Assembly Method :: CLC Genomics Workbench v. v11
Sequencing Technology :: IonTorrent
##Assembly-Data-END##
SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(28-JAN-2020) Department of Microbiology, University of Szeged,
Kozep fasor 52, Szeged, Csongrad 6726, Hungary"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7445
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
terminator complement(268..295)
/label="rrnB T2 terminator"
/note="transcription terminator T2 from the E. coli rrnB
gene"
terminator complement(387..473)
/label="rrnB T1 terminator"
/note="transcription terminator T1 from the E. coli rrnB
gene"
primer_bind 537..553
/label="M13 fwd"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
misc_feature 570..575
/label="StuI site for cassette release"
/note="StuI site for cassette release"
misc_feature 576..1039
/note="site of recombination; CpNEUT5LUpup from C.
parapsilosis"
regulatory 1096..1943
/label="Candida maltosa LEU2 promoter"
/note="Candida maltosa LEU2 promoter"
/regulatory_class="promoter"
CDS 1944..3062
/gene="LEU2"
/label="3-isopropylmalate dehydrogenase"
/note="3-isopropylmalate dehydrogenase from Candida
maltosa. Accession#: P07139"
regulatory 3066..3280
/label="Candida maltosa LEU2 terminator"
/note="Candida maltosa LEU2 terminator"
/regulatory_class="terminator"
regulatory complement(3333..3573)
/label="Saccharomyces cerevisiae URA3 terminator"
/note="Saccharomyces cerevisiae URA3 terminator"
/regulatory_class="terminator"
protein_bind 3594..3618
/label="attB2"
/note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"
CDS complement(3622..4335)
/label="yeGFP"
/note="yeast-enhanced green fluorescent protein"
protein_bind complement(4336..4360)
/label="attB1"
/note="recombination site for the Gateway(R) BP reaction"
regulatory complement(4367..5216)
/label="Candida albicans TDH3 promoter"
/note="Candida albicans TDH3 promoter"
/regulatory_class="promoter"
misc_feature 5223..5673
/note="site of recombination; CpNEUT5LDowndown from C.
parapsilosis"
misc_feature 5674..5679
/label="StuI site for cassette release"
/note="StuI site for cassette release"
promoter complement(5687..5705)
/label="T7 promoter"
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(5710..5726)
/label="M13 rev"
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 5839..6645
/label="KanR"
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
rep_origin 6795..7383
/direction=RIGHT
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"