Note: pSPYCE‑35S (13.2 kb) is a binary vector for plant transformation. It uses the CaMV 35S promoter to express a VC155‑tagged protein, flanked by T‑DNA borders for genomic integration. Includes KanR (plant), TetR (bacteria), plus trfA, oriV, traJ, and oriT for replication and conjugation in Agrobacterium.
基本信息
- 载体名称:
- pSPYCE-35S
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 13231 bp
- 载体类型:
- Bioluminescence resonance energy transfer (BRET)
- 复制子:
- oriV
- 宿主:
- Plants
- 筛选标记:
- Neo/G418
- 启动子:
- CaMV35S(long)
- 感受态:
- DH5a
- 培养温度:
- 37℃
产品信息
质粒编号:V015149
质粒名称:pSPYCE-35S
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pSPYCE-35S 质粒 (编号: V015149)序列
LOCUS 62056_20155 13231 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION synthetic circular DNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 13231)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..13231
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
CDS complement(148..516)
/codon_start=1
/label=traJ
/note="oriT-recognizing protein"
/translation="MADETKPTRKGSPPIKVYCLPDERRAIEEKAAAAGMSLSAYLLAV
GQGYKITGVVDYEHVRELARINGDLGRLGGLLKLWLTDDPRTARFGDATILALLAKIEE
KQDELGKVMMGVVRPRAEP"
oriT complement(549..658)
/direction=LEFT
/label=oriT
/note="incP origin of transfer"
CDS complement(1342..1989)
/codon_start=1
/label=TetR
/note="tetracycline resistance regulatory protein"
/translation="MTKLQPNTVIRAALDLLNEVGVDGLTTRKLAERLGVQQPALYWHF
RNKRALLDALAEAMLAENHTHSVPRADDDWRSFLIGNARSFRQALLAYRDGARIHAGTR
PGAPQMETADAQLRFLCEAGFSAGDAVNALMTISYFTVGAVLEEQAGDSDAGERGGTVE
QAPLSPLLRAAIDAFDEAGPDAAFEQGLAVIVDGLAKRRLVVRNVEGPRKGDD"
misc_feature complement(2454..2478)
/label=RB T-DNA repeat
/note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
rep_origin complement(2608..3232)
/direction=LEFT
/label=oriV
/note="incP origin of replication"
terminator 4022..4274
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"
protein_bind 4823..4844
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 4859..4889
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
promoter 5461..5806
/label=CaMV 35S promoter
/note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
virus"
CDS 5902..5928
/codon_start=1
/label=HA
/note="HA (human influenza hemagglutinin) epitope tag"
/translation="YPYDVPDYA"
CDS 5929..6180
/codon_start=1
/label=VC155
/note="C-terminal fragment of mVenus for use in bimolecular
fluorescence complementation (BiFC) (Kodama and Hu, 2010)"
/translation="DKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNH
YLSYQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK"
misc_feature complement(7095..7119)
/label=LB T-DNA repeat
/note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
CDS complement(8718..9863)
/codon_start=1
/label=trfA
/note="trans-acting replication protein that binds to and
activates oriV"
/translation="MNRTFDRKAYRQELIDAGFSAEDAETIASRTVMRAPRETFQSVGS
MVQQATAKIERDSVQLAPPALPAPSAAVERSRRLEQEAAGLAKSMTIDTRGTMTTKKRK
TAGEDLAKQVSEAKQAALLKHTKQQIKEMQLSLFDIAPWPDTMRAMPNDTARSALFTTR
NKKIPREALQNKVIFHVNKDVKITYTGVELRADDDELVWQQVLEYAKRTPIGEPITFTF
YELCQDLGWSINGRYYTKAEECLSRLQATAMGFTSDRVGHLESVSLLHRFRVLDRGKKT
SRCQVLIDEEIVVLFAGDHYTKFIWEKYRKLSPTARRMFDYFSSHREPYPLKLETFRLM
CGSDSTRVKKWREQVGEACEELRGSGLVEHAWVNDDLVHCKR"
CDS complement(10165..10956)
/codon_start=1
/label=KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
/translation="MAKMRISPELKKLIEKYRCVKDTEGMSPAKVYKLVGENENLYLKM
TDSRYKGTTYDVEREKDMMLWLEGKLPVPKVLHFERHDGWSNLLMSEADGVLCSEEYED
EQSPEKIIELYAECIRLFHSIDISDCPYTNSLDSRLAELDYLLNNDLADVDCENWEEDT
PFKDPRELYDFLKTEKPEEELVFSHGDLGDSNIFVKDGKVSGFIDLGRSGRADKWYDIA
FCVRSIREDIGEEQYVELFFDLLGIKPDWEKIKYYILLDELF"
mobile_element 11148..11915
/label=IS1
/note="prokaryotic transposable element"
rep_origin complement(12616..13226)
/direction=LEFT
/label=oriV
/note="origin of replication for the bacterial F plasmid"