基本信息
- 载体名称:
- pLVX-TetOne-TRE3GS-hTERT-Puro
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 12611 bp
- 载体类型:
- Protein expression, Tetracycline inducible
- 复制子:
- ori
- 宿主:
- Mammalian cells, Lentivirus
- 筛选标记:
- Puro
- 启动子:
- hPGK
- 5'引物:
- Htert-F3
- 培养温度:
- 37℃
产品信息
质粒编号:V015091
质粒名称:pLVX-TetOne-TRE3GS-hTERT-Puro
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pLVX-TetOne-TRE3GS-hTERT-Puro 质粒 (编号: V015091)序列
LOCUS V015091 12611 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Exported.
ACCESSION V015091
VERSION V015091
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
.
REFERENCE 1 (bases 1 to 12611)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..12611
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
polyA_signal complement(216..350)
/label="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
promoter 398..502
/label="AmpR promoter"
CDS 503..1360
/label="AmpR"
/note="beta-lactamase"
rep_origin 1534..2119
/label="ori"
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
protein_bind 2407..2428
/label="CAP binding site"
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 2443..2473
/label="lac promoter"
/note="promoter for the E. coli lac operon"
LTR complement(2650..3283)
/label="5' LTR"
/note="5' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"
misc_feature complement(3490..4078)
/label="WPRE"
/note="woodchuck hepatitis virus posttranscriptional
regulatory element"
CDS complement(4095..4691)
/label="PuroR"
/note="puromycin N-acetyltransferase"
promoter complement(4700..5029)
/label="SV40 promoter"
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS complement(5043..5786)
/label="Tet-On(R) 3G"
/note="modified rtTA protein that binds tightly to
promoters containing the tet operator in the presence of
doxycycline"
promoter complement(5805..6315)
/label="hPGK promoter"
/note="human phosphoglycerate kinase 1 promoter"
promoter 6332..6699
/label="TRE3GS promoter"
/note="3rd-generation Tet-responsive promoter that can be
activated by binding of Tet-On(R) 3G, modified to eliminate
binding sites for endogenous mammalian transcription
factors"
CDS 6712..10107
/label="hTERT"
/note="human telomerase reverse transcriptase, the
catalytic subunit of telomerase"
polyA_signal complement(10291..10425)
/label="SV40 poly(A) signal"
/note="SV40 polyadenylation signal"
misc_feature complement(10468..10585)
/label="cPPT/CTS"
/note="central polypurine tract and central termination
sequence of HIV-1"
CDS complement(10657..10698)
/note="Protein Tat from Human immunodeficiency virus type 1
group M subtype B (isolate WMJ22). Accession#: P12509"
/label="Protein Tat"
CDS complement(10847..10891)
/label="gp41 peptide"
/note="antigenic peptide corresponding to amino acids 655
to 669 of the HIV envelope protein gp41 (Lutje Hulsik et
al., 2013)"
misc_feature complement(11076..11309)
/label="RRE"
/note="The Rev response element (RRE) of HIV-1 allows for
Rev-dependent mRNA export from the nucleus to the
cytoplasm."
misc_feature complement(11806..11931)
/label="HIV-1 Psi"
/note="packaging signal of human immunodeficiency virus
type 1"
LTR complement(11978..12611)
/label="3' LTR"
/note="3' long terminal repeat (LTR) from HIV-1"