我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pSoup-P19
载体抗性:
Tetracycline
载体长度:
10771 bp
载体类型:
Packaging assistance
复制子:
oriV
宿主:
Plants
启动子:
CaMV 35S
感受态:
DH10B
培养温度:
37℃

pSoup-P19 载体图谱

pSoup-P1910771 bp5001000150020002500300035004000450050005500600065007000750080008500900095001000010500oriTtraJoriVLB T-DNA repeatT7 promoterCaMV poly(A) signalRNA silencing suppressor p19CaMV 35S promoterT3 promoterlac promoterCAP binding sitetet promoterTcRtrfARepATetR

质粒操作方法

1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pSoup-P19 载体序列

LOCUS       V014964                10771 bp    DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V014964
VERSION     V014964
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 10771)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..10771
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     oriT            618..727
                     /label="oriT"
                     /note="incP origin of transfer"
     CDS             760..1128
                     /label="traJ"
                     /note="oriT-recognizing protein"
     rep_origin      1258..1969
                     /label="oriV"
                     /note="incP origin of replication"
     misc_feature    2469..2491
                     /label="LB T-DNA repeat"
                     /note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA
                     (truncated)"
     promoter        2682..2700
                     /label="T7 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
     polyA_signal    complement(2776..2952)
                     /label="CaMV poly(A) signal"
                     /note="cauliflower mosaic virus polyadenylation signal"
     CDS             complement(3025..3540)
                     /note="RNA silencing suppressor p19 from Tomato bushy stunt
                     virus (strain Cherry). Accession#: P11690"
                     /label="RNA silencing suppressor p19"
     promoter        complement(3579..3924)
                     /label="CaMV 35S promoter"
                     /note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
                     virus"
     promoter        complement(3998..4016)
                     /label="T3 promoter"
                     /note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
     promoter        complement(4085..4115)
                     /label="lac promoter"
                     /note="promoter for the E. coli lac operon"
     protein_bind    complement(4130..4151)
                     /label="CAP binding site"
                     /note="CAP binding activates transcription in the presence
                     of cAMP."
     promoter        4398..4426
                     /label="tet promoter"
                     /note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
                     gene"
     CDS             4474..5661
                     /label="TcR"
                     /note="tetracycline efflux protein"
     CDS             6163..7308
                     /label="trfA"
                     /note="trans-acting replication protein that binds to and
                     activates oriV"
     CDS             8692..9660
                     /label="RepA"
                     /note="replication protein of plasmid pSa"
     CDS             10058..10705
                     /label="TetR"
                     /note="tetracycline resistance regulatory protein"