首页技术支持质粒载体

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

The pLCNICK plasmid is a crucial tool for genome editing in Lactobacillus casei. Derived from the CRISPR-Cas9D10A nickase system, it enables rapid and precise genetic manipulations

载体名称:
pLCNICK
载体抗性:
Kanamycin
载体长度:
14366 bp
载体类型:
Gene knockout
复制子:
pSC101 ori
宿主:
Lactobacillus
拷贝数:
Low Copy
感受态:
Stbl3
培养温度:
30℃

pLCNICK 载体图谱

pLCNICK14366 bp7001400210028003500420049005600630070007700840091009800105001120011900126001330014000Rep101(Ts)pSC101 oriKanRCas9(D10A)rRNA adenine N-6-methyltransferasegRNA scaffold

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pLCNICK 载体序列

LOCUS       V014621                14366 bp    DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Exported.
ACCESSION   V014621
VERSION     V014621
KEYWORDS    .
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
            .
REFERENCE   1  (bases 1 to 14366)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..14366
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     CDS             complement(110..1057)
                     /label="Rep101(Ts)"
                     /note="temperature-sensitive version of the RepA protein
                     needed for replication with the pSC101 origin (Armstrong et
                     al., 1984)"
     rep_origin      complement(1105..1327)
                     /direction=LEFT
                     /label="pSC101 ori"
                     /note="low-copy replication origin that requires the Rep101
                     protein"
     CDS             complement(1982..2794)
                     /label="KanR"
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"
     CDS             3092..7195
                     /label="Cas9(D10A)"
                     /note="nickase mutant of the Cas9 endonuclease from the
                     Streptococcus pyogenes Type II CRISPR/Cas system"
     CDS             complement(10863..11597)
                     /gene="ermBP"
                     /label="rRNA adenine N-6-methyltransferase"
                     /note="rRNA adenine N-6-methyltransferase from Enterococcus
                     faecalis. Accession#: P0A4D5"
     misc_RNA        complement(13964..14039)
                     /label="gRNA scaffold"
                     /note="guide RNA scaffold for the Streptococcus pyogenes
                     CRISPR/Cas9 system"