Note:
基本信息
- 载体名称:
- pHTC
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 6185 bp
- 载体类型:
- HaloTag CMV-neo vector
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Hartnett J, Slater M.
- 启动子:
- SV40
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pHTC 质粒 (编号: V005481)序列
LOCUS 40924_25156 6185 bp DNA circular SYN 18-DEC-2018
DEFINITION HaloTag CMV-neo vector pHTC, complete sequence.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 6185)
AUTHORS Hartnett J, Slater M.
TITLE Direct Submission
JOURNAL Submitted (05-MAY-2011) Promega Corporation, 2800 Woods Hollow Road,
Madison, WI 53711, USA
REFERENCE 2 (bases 1 to 6185)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 6185)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Submitted
(05-MAY-2011) Promega Corporation, 2800 Woods Hollow Road, Madison,
WI 53711, USA"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..6185
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 139..517
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 518..721
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
intron 857..989
/label=chimeric intron
/note="chimera between introns from human beta-globin and
immunoglobulin heavy chain genes"
promoter 1033..1051
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 1052..1129
/label=multiple cloning site
/note="multiple cloning site"
CDS 1139..1159
/codon_start=1
/label=TEV site
/note="tobacco etch virus (TEV) protease recognition and
cleavage site"
/translation="EDLYFQS"
CDS 1172..2059
/codon_start=1
/label=HaloTag(R)
/note="modified bacterial dehalogenase that forms covalent
bonds with chloroalkane derivatives"
/translation="SEIGTGFPFDPHYVEVLGERMHYVDVGPRDGTPVLFLHGNPTSSY
VWRNIIPHVAPTHRCIAPDLIGMGKSDKPDLGYFFDDHVRFMDAFIEALGLEEVVLVIH
DWGSALGFHWAKRNPERVKGIAFMEFIRPIPTWDEWPEFARETFQAFRTTDVGRKLIID
QNVFIEGTLPMGVVRPLTEVEMDHYREPFLNPVDREPLWRFPNELPIAGEPANIVALVE
EYMDWLHQSPVPKLLFWGTPGVLIPPAEAARLAKSLPNCKAVDIGPGLNLLQEDNPDLI
GSEIARWLSTLEISG"
polyA_signal complement(2186..2307)
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
promoter 2552..2909
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2960..3751
/codon_start=1
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3818..3866
/label=poly(A) signal
/note="synthetic polyadenylation signal"
promoter 4022..4126
/label=AmpR promoter
CDS 4127..4984
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin complement(5145..5733)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
misc_feature 5849..6132
/label=cer region
/note="ColE1-derived recombination site that helps to
maintain plasmids as monomers"