Note: Vectors contain T7 and SP6 RNA polymerase promoters flanking a multiple cloning region within the alpha-peptide coding region of the enzyme beta-galactosidase.
基本信息
- 载体名称:
- pGEM-T Easy
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 3015 bp
- 载体类型:
- Cloning Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Promega
- 拷贝数:
- High copy number
- 5'引物:
- M13 fwd
- 3'引物:
- M13 rev
- 感受态:
- Stbl3
- 培养温度:
- 37℃
产品信息
质粒编号:V012473
质粒名称:pGEM-T Easy
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGEM-T Easy 质粒 (编号: V012473)序列
LOCUS Exported 3015 bp DNA circular SYN 30-SEP-2025
DEFINITION Parental vector for TA cloning of PCR products. The insertion site
is flanked by BstZI, EcoRI, and NotI sites.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pGEM-T Easy
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 3015)
AUTHORS Promega
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 3015)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT Linearize at EcoRV to create a TA cloning vector.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..3015
/lab_host="Escherichia coli"
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
source join(464..3015,1..463)
/lab_host="Escherichia coli"
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
source join(623..3015,1..622)
/lab_host="Escherichia coli"
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 210..240
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind 248..264
/label=lac operator
/bound_moiety="lac repressor encoded by lacI"
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
primer_bind 272..288
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 284..667
/codon_start=1
/gene="lacZ (fragment)"
/product="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"
/label=lacZ-alpha
/translation="MTMITPSYLGDTIEYSSYASNALGALPYGRPAGGREFTSDIEFPR
PPWRPGACDVGPNSPYSESYYNSLAVVLQRRDWENPGVTQLNRLAAHPPFASWRNSEEA
RTDRPSQQLRSLNGEWTRPVAAH"
promoter 306..324
/label=SP6 promoter
/note="promoter for bacteriophage SP6 RNA polymerase"
misc_feature 336..454
/label=MCS
/note="multiple cloning site"
promoter 462..480
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
primer_bind complement(487..503)
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
rep_origin 644..1099
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1177..1281
/gene="bla"
/label=AmpR promoter
CDS 1282..2142
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 2313..2901
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"