我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来,主要是为了方便研究工作,其中一小部分质粒进行了质量控制,可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用,不能应用于临床试验,包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确,但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列,可能与测序结果不一致,请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序,本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%,则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知,具有很大的不确定性,在任何情况下,我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
pSC101 ori is a low-copy replication origin that requires the Rep101 protein, which is a temperature-sensitive protein. When bacteria containing a plasmid with this ori is cultured at 37℃, the plasmid will be lost.
- 载体名称:
- pSC101
- 载体抗性:
- Tetracycline
- 载体长度:
- 9263 bp
- 载体类型:
- Cloning Vectors
- 复制子:
- pSC101 ori
- 载体来源:
- Bernardi A, Bernardi F.
- 拷贝数:
- Low copy number
- 启动子:
- tet
pSC101 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式:质粒干粉(常温运输,存于-20度,请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl ddH2O溶解质粒;(质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大,这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致,因此建议先转化提质粒后再使用)
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min,加入2μl质粒,再冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min,仅留100μl上清液重悬细菌沉淀,并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h,如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化;没有菌落则加入10μl质粒转化;建议不要直接转表达感受态, 要先转克隆感受态,重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pSC101 载体序列
LOCUS 40924_38833 9263 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Low copy number plasmid from Salmonella. pSC101 was the first
plasmid vector used for cloning.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 9263)
AUTHORS Bernardi A, Bernardi F.
TITLE Complete sequence of pSC101.
JOURNAL Nucleic Acids Res. 1984;12:9415-26.
PUBMED 6096829
REFERENCE 2 (bases 1 to 9263)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 9263)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nucleic
Acids Res."; date: "1984"; volume: "12"; pages: "9415-26"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..9263
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 10..38
/label=tet promoter
/note="E. coli promoter for tetracycline efflux protein
gene"
CDS 86..1273
/codon_start=1
/label=TcR
/note="tetracycline efflux protein"
/translation="MKSNNALIVILGTVTLDAVGIGLVMPVLPGLLRDIVHSDSIASHY
GVLLALYALMQFLCAPVLGALSDRFGRRPVLLASLLGATIDYAIMATTPVLWILYAGRI
VAGITGATGAVAGAYIADITDGEDRARHFGLMSACFGVGMVAGPVAGGLLGAISLHAPF
LAAAVLNGLNLLLGCFLMQESHKGERRPMPLRAFNPVSSFRWARGMTIVAALMTVFFIM
QLVGQVPAALWVIFGEDRFRWSATMIGLSLAVFGILHALAQAFVTGPATKRFGEKQAII
AGMAADALGYVLLAFATRGWMAFPIMILLASGGIGMPALQAMLSRQVDDDHQGQLQGSL
AALTSLTSITGPLIVTAIYAASASTWNGLAWIVGAALYLVCLPALRRGAWSRATST"
rep_origin 5003..5225
/label=pSC101 ori
/note="low-copy replication origin that requires the Rep101
protein"
CDS 5273..6220
/codon_start=1
/label=Rep101
/note="RepA protein needed for replication with the pSC101
origin"
/translation="MSELVVFKANELAISRYDLTEHETKLILCCVALLNPTIENPTRKE
RTVSFTYNQYAQMMNISRENAYGVLAKATRELMTRTVEIRNPLVKGFEIFQWTNYAKFS
SEKLELVFSEEILPYLFQLKKFIKYNLEHVKSFENKYSMRIYEWLLKELTQKKTHKANI
EISLDEFKFMLMLENNYHEFKRLNQWVLKPISKDLNTYSNMKLVVDKRGRPTDTLIFQV
ELDRQMDLVTELENNQIKMNGDKIPTTITSDSYLRNGLRKTLHDALTAKIQLTSFEAKF
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