质粒编号
质粒名称
规格
价格
V012370
pUAST
5 μg (冻干粉)
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
- 载体名称:
- pUAST
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 8897 bp
- 载体类型:
- Cloning Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Brand AH, Perrimon N.
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- hsp70
pUAST 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pUAST 载体序列
LOCUS pUAST. 8897 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION P element-based vector for Gal4-regulated expression of genes in
Drosophila.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pUAST
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 8897)
AUTHORS Brand AH, Perrimon N.
TITLE Targeted gene expression as a means of altering cell fates and
generating dominant phenotypes.
JOURNAL Development 1993;118:401-15.
PUBMED 8223268
REFERENCE 2 (bases 1 to 8897)
AUTHORS Brand Lab
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 8897)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName:
"Development"; date: "1993"; volume: "118"; pages: "401-15"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
COMMENT http://www.gurdon.cam.ac.uk/~brandlab/3.html
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..8897
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
misc_feature 1..46
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
intron 124..189
/label=small t intron
/note="SV40 (simian virus 40) small t antigen intron"
CDS 319..339
/label=SV40 NLS
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
polyA_signal 611..745
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
gene 763..4899
/label=mini-white
/note="This modified version of the white gene lacks part
of the first intron."
misc_feature complement(4910..5495)
/label=P element 5' end
misc_feature 5496..5724
/label=white linker sequence
/note="white linker sequence"
rep_origin complement(5730..6318)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(6492..7349)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(7350..7454)
/label=AmpR promoter
misc_feature 7755..8255
/label=white linker sequence
/note="white linker sequence"
misc_feature complement(8256..8488)
/label=P element 3' end
/note="P element 3' end"
protein_bind 8533..8627
/label=5X UAS
/note="five tandem copies of the 'ScaI site' 17-mer
CGGAGTACTGTCCTCCG, an upstream activating sequence (UAS)
that efficiently binds yeast Gal4 (Webster et al., 1988;
Pfeiffer et al., 2010)"
promoter 8646..8884
/label=hsp70 promoter
/note="Drosophila melanogaster hsp70Bb promoter"