Note:
基本信息
- 载体名称:
- HBT-pcoCas9
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 7940 bp
- 载体类型:
- CRISPR Plasmids
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Li JF, Norville JE, Aach J, McCormack M, Zhang D, Bush J, Church GM,
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- 35SPPDK
产品信息
质粒编号:V012338
质粒名称:HBT-pcoCas9
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
HBT-pcoCas9 质粒 (编号: V012338)序列
LOCUS HBT-pcoCas9. 7940 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Plasmid for transient expression of plant codon-optimized Cas9 in
plant cells. Use together with pUC119-gRNA.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS HBT-pcoCas9
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 7940)
AUTHORS Li JF, Norville JE, Aach J, McCormack M, Zhang D, Bush J, Church GM,
Sheen J.
TITLE Multiplex and homologous recombination-mediated genome editing in
Arabidopsis and Nicotiana benthamiana using guide RNA and Cas9.
JOURNAL Nat. Biotechnol. 2013;31:688-91.
PUBMED 23929339
REFERENCE 2 (bases 1 to 7940)
AUTHORS Sheen Lab / Addgene #52254
TITLE Direct Submission
REFERENCE 3 (bases 1 to 7940)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Nat.
Biotechnol."; date: "2013"; volume: "31"; pages: "688-91"
COMMENT SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..7940
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind complement(39..55)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind complement(63..79)
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
promoter complement(87..117)
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
protein_bind complement(132..153)
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
rep_origin complement(441..1029)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(1203..2060)
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
promoter complement(2061..2165)
/label=AmpR promoter
primer_bind 2639..2655
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 2722..3231
/label=35SPPDK promoter
/note="hybrid promoter consisting of the cauliflower mosaic
virus 35S enhancer fused to the maize C4PPDK basal promoter
(Yoo et al., 2007)"
CDS 3240..3242
/codon_start=1
/product="start codon"
/label=start codon
/note="ATG"
/translation="M"
CDS 3243..3290
/label=2xFLAG
/note="two tandem FLAG(R) epitope tags"
CDS 3297..3317
/label=SV40 NLS
/note="nuclear localization signal of SV40 (simian virus
40) large T antigen"
intron 4779..4967
/label=IV2 intron
/note="modified second intron of the potato ST-LS1 gene
(Vancanneyt et al., 1990)"
CDS 5133..7631
/label=Cas9(C)
/note="C-terminal portion of Streptococcus pyogenes Cas9
(Zetsche et al., 2015)"
CDS 7632..7679
/label=nucleoplasmin NLS
/note="bipartite nuclear localization signal from
nucleoplasmin"
terminator 7688..7940
/label=NOS terminator
/note="nopaline synthase terminator and poly(A) signal"