Note:
基本信息
- 载体名称:
- pDEST R4-R3 Vector II
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4555 bp
- 载体类型:
- Gateway Cloning Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Invitrogen (Life Technologies)
- 拷贝数:
- High copy number
- 5'引物:
- M13 fwd
- 3'引物:
- M13 rev
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pDEST R4-R3 Vector II 质粒 (编号: V011841)序列
LOCUS 40924_14415 4555 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Improved Gateway(R) destination vector for generating an expression
clone by three-fragment multisite recombination.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS .
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4555)
AUTHORS Invitrogen (Life Technologies)
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 4555)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4555
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
primer_bind 1..17
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
protein_bind 36..160
/label=attR4
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
CDS complement(511..813)
/codon_start=1
/label=ccdB
/note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
/translation="MQFKVYTYKRESRYRLFVDVQSDIIDTPGRRMVIPLASARLLSDK
VSRELYPVVHIGDESWRMMTTDMASVPVSVIGEEVADLSHRENDIKNAINLMFWGI"
CDS complement(1163..1816)
/codon_start=1
/label=CmR
/note="chloramphenicol acetyltransferase"
/translation="MEKKITGYTTVDISQWHRKEHFEAFQSVAQCTYNQTVQLDITAFL
KTVKKNKHKFYPAFIHILARLMNAHPEFRMAMKDGELVIWDSVHPCYTVFHEQTETFSS
LWSEYHDDFRQFLHIYSQDVACYGENLAYFPKGFIENMFFVSANPWVSFTSFDLNVANM
DNFFAPVFTMGKYYTQGDKVLMPLAIQVHHAVCDGFHVGRMLNELQQYCDEWQGG"
promoter complement(1817..1919)
/label=cat promoter
/note="promoter of the E. coli cat gene encoding
chloramphenicol acetyltransferase"
protein_bind complement(2065..2188)
/label=attR3
/note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
primer_bind complement(2196..2212)
/label=M13 fwd
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
promoter 2686..2790
/label=AmpR promoter
CDS 2791..3648
/codon_start=1
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGSDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
rep_origin 3822..4410
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"