Note:
基本信息
- 载体名称:
- pcDNA3.1/myc-His(-) C
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 5521 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Invitrogen (Life Technologies)
- 筛选标记:
- Neomycin/G418(Geneticin)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- SV40
产品信息
质粒编号:V011332
质粒名称:pcDNA3.1/myc-His(-) C
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pcDNA3.1/myc-His(-) C 质粒 (编号: V011332)序列
LOCUS Exported 5521 bp DNA circular SYN 05-JAN-2013
DEFINITION Vector for expressing C-terminally Myc- and 6xHis-tagged proteins in
mammalian cells.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pcDNA3.1/myc-His(-) C
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 5521)
AUTHORS Invitrogen (Life Technologies)
TITLE Direct Submission
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..5521
/lab_host="Mammalian Cells"
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 235..614
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 615..818
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 863..881
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
misc_feature 895..1000
/label=MCS
/note="multiple cloning site"
CDS 1006..1035
/codon_start=1
/product="Myc (human c-Myc oncogene) epitope tag"
/label=Myc
/translation="EQKLISEEDL"
CDS 1051..1068
/codon_start=1
/product="6xHis affinity tag"
/label=6xHis
/translation="HHHHHH"
polyA_signal 1118..1342
/label=bGH poly(A) signal
/note="bovine growth hormone polyadenylation signal"
rep_origin 1388..1816
/direction=RIGHT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1830..2159
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
rep_origin 2010..2145
/label=SV40 ori
/note="SV40 origin of replication"
CDS 2226..3020
/codon_start=1
/gene="aph(3')-II (or nptII)"
/product="aminoglycoside phosphotransferase from Tn5"
/label=NeoR/KanR
/note="confers resistance to neomycin, kanamycin, and G418
(Geneticin)"
/translation="MIEQDGLHAGSPAAWVERLFGYDWAQQTIGCSDAAVFRLSAQGRP
VLFVKTDLSGALNELQDEAARLSWLATTGVPCAAVLDVVTEAGRDWLLLGEVPGQDLLS
SHLAPAEKVSIMADAMRRLHTLDPATCPFDHQAKHRIERARTRMEAGLVDQDDLDEEHQ
GLAPAELFARLKARMPDGEDLVVTHGDACLPNIMVENGRFSGFIDCGRLGVADRYQDIA
LATRDIAEELGGEWADRFLVLYGIAAPDSQRIAFYRLLDEFF"
polyA_signal 3194..3315
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
primer_bind complement(3364..3380)
/label=M13 rev
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
rep_origin complement(3766..4354)
/direction=LEFT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
CDS complement(4525..5385)
/codon_start=1
/gene="bla"
/product="beta-lactamase"
/label=AmpR
/note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
related antibiotics"
/translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
LIKHW"
promoter complement(5386..5490)
/gene="bla"
/label=AmpR promoter