我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
The pCMV-Tag 4A is a mammalian expression vector for tagging proteins with a C-terminal FLAG epitope. Using pCMV-Tag 4B or pCMV-Tag 4C for other reading frames.
- 载体名称:
- pCMV-Tag 4A
- 载体抗性:
- Kanamycin
- 载体长度:
- 4319 bp
- 载体类型:
- Mammalian Expression Vectors
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- Agilent Technologies
- 筛选标记:
- Neomycin/G418(Geneticin)
- 拷贝数:
- High copy number
- 启动子:
- CMV
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
pCMV-Tag 4A 载体图谱
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pCMV-Tag 4A 载体序列
LOCUS pCMV-Tag_4A. 4319 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Mammalian expression vector for tagging proteins with a C-terminal
FLAG epitope. For other reading frames, use pCMV-Tag 4B or pCMV-Tag
4C.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pCMV-Tag 4A
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4319)
AUTHORS Agilent Technologies
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 4319)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
COMMENT The cloned gene must include a Kozak sequence and start codon.
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4319
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
enhancer 67..370
/label=CMV enhancer
/note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"
promoter 371..574
/label=CMV promoter
/note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early
promoter"
promoter 620..638
/label=T3 promoter
/note="promoter for bacteriophage T3 RNA polymerase"
primer_bind complement(725..741)
/label=KS primer
/note="common sequencing primer, one of multiple similar
variants"
CDS 744..767
/label=FLAG
/note="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
cleavage site"
misc_feature 783..793
/label=stop codons
/note="stop codons"
/note="stop codons in all three reading frames"
promoter complement(821..839)
/label=T7 promoter
/note="promoter for bacteriophage T7 RNA polymerase"
polyA_signal 1113..1234
/label=SV40 poly(A) signal
/note="SV40 polyadenylation signal"
rep_origin complement(1241..1696)
/direction=LEFT
/label=f1 ori
/note="f1 bacteriophage origin of replication; arrow
indicates direction of (+) strand synthesis"
promoter 1723..1825
/label=AmpR promoter
promoter 1829..2186
/label=SV40 promoter
/note="SV40 enhancer and early promoter"
CDS 2221..3012
/label=NeoR/KanR
/note="aminoglycoside phosphotransferase"
polyA_signal 3247..3294
/label=HSV TK poly(A) signal
/note="herpes simplex virus thymidine kinase
polyadenylation signal (Cole and Stacy, 1985)"
rep_origin 3623..4211
/direction=RIGHT
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"