Note:
基本信息
- 载体名称:
- pGEX-5X-3
- 载体抗性:
- Ampicillin
- 载体长度:
- 4974 bp
- 载体类型:
- pGEX Vectors (GE Healthcare)
- 复制子:
- ori
- 载体来源:
- GE Healthcare
- 拷贝数:
- High copy number
- 感受态:
- DH10B
- 培养温度:
- 37℃
产品信息
质粒编号:V010913
质粒名称:pGEX-5X-3
规格:5 μg (冻干粉)
下载资源
我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。
确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)
开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。
由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。
质粒操作方法
1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)
2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）
3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);
5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);
7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
pGEX-5X-3 质粒 (编号: V010913)序列
LOCUS pGEX-5X-3. 4974 bp DNA circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION Bacterial vector for expressing GST fusion proteins with a Factor Xa
site. For other reading frames, use pGEX-5X-1 or pGEX-5X-2.
ACCESSION .
VERSION .
KEYWORDS pGEX-5X-3
SOURCE synthetic DNA construct
ORGANISM synthetic DNA construct
REFERENCE 1 (bases 1 to 4974)
AUTHORS GE Healthcare
TITLE Direct Submission
REFERENCE 2 (bases 1 to 4974)
AUTHORS .
TITLE Direct Submission
COMMENT SGRef: number: 1; type: "Journal Article"
FEATURES Location/Qualifiers
source 1..4974
/mol_type="other DNA"
/organism="synthetic DNA construct"
promoter 183..211
/label=tac promoter
/note="strong E. coli promoter; hybrid between the trp and
lac UV5 promoters"
protein_bind 219..235
/label=lac operator
/note="The lac repressor binds to the lac operator to
inhibit transcription in E. coli. This inhibition can be
relieved by adding lactose or
isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside (IPTG)."
CDS 258..911
/label=GST
/note="glutathione S-transferase from Schistosoma
japonicum"
CDS 921..932
/label=Factor Xa site
/note="Factor Xa recognition and cleavage site"
misc_feature 934..971
/label=MCS
/note="MCS"
/note="multiple cloning site"
misc_feature 976..986
/label=stop codons
/note="stop codons"
/note="stop codons in all three reading frames"
promoter 1277..1381
/label=AmpR promoter
CDS 1382..2239
/label=AmpR
/note="beta-lactamase"
rep_origin 2413..3001
/label=ori
/note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of
replication"
promoter 3245..3322
/label=lacIq promoter
/note="In the lacIq allele, a single base change in the
promoter boosts expression of the lacI gene about 10-fold."
CDS 3323..4402
/label=lacI
/note="lac repressor"
protein_bind 4418..4439
/label=CAP binding site
/note="CAP binding activates transcription in the presence
of cAMP."
promoter 4454..4484
/label=lac promoter
/note="promoter for the E. coli lac operon"
CDS 4528..4701
/label=lacZ-alpha
/note="LacZ-alpha fragment of beta-galactosidase"