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pEarleyGate 202 载体 (V010860)

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

所有的产品都严格仅供科学研究使用，不能应用于临床试验，包括人体摄入、注射或外用的药理学用途。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验结果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

载体名称:
pEarleyGate 202
载体抗性:
Chloramphenicol
载体长度:
11776 bp
载体类型:
Plant Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Earley KW, Haag JR, Pontes O, Opper K, Juehne T, Song K, Pikaard CS.
拷贝数:
High copy number
启动子:
MAS

pEarleyGate 202 载体图谱

pEarleyGate 20211776 bp50010001500200025003000350040004500500055006000650070007500800085009000950010000105001100011500LB T-DNA repeatMAS terminatorBlpRMAS promoterCaMV 35S promoterTMV OmegaATGFLAGattR1lac UV5 promoterCmRccdBattR2OCS terminatorRB T-DNA repeatpVS1 StaApVS1 RepApVS1 oriVbomoriKanR

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态， 要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

pEarleyGate 202 载体序列

LOCUS       pEarleyGate_202.       11776 bp DNA     circular SYN 01-JAN-1980
DEFINITION  Gateway(R)-compatible plant transformation vector with an N-terminal
            FLAG tag.
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pEarleyGate 202
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 11776)
  AUTHORS   Earley KW, Haag JR, Pontes O, Opper K, Juehne T, Song K, Pikaard CS.
  TITLE     Gateway-compatible vectors for plant functional genomics and 
            proteomics.
  JOURNAL   Plant J. 2006;45:616-29.
  PUBMED    16441352
REFERENCE   2  (bases 1 to 11776)
  AUTHORS   Pikaard Lab
  TITLE     Direct Submission
REFERENCE   3  (bases 1 to 11776)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
COMMENT     SGRef: number: 1; type: "Journal Article"; journalName: "Plant J."; 
            date: "2006"; volume: "45"; pages: "616-29"
COMMENT     SGRef: number: 2; type: "Journal Article"
COMMENT     The sequence was corrected by inserting a G at position 7883.
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..11776
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     misc_feature    1..25
                     /label=LB T-DNA repeat
                     /note="left border repeat from nopaline C58 T-DNA"
     terminator      complement(111..363)
                     /label=MAS terminator
                     /note="mannopine synthase terminator"
     CDS             complement(376..924)
                     /label=BlpR
                     /note="phosphinothricin acetyltransferase"
     promoter        complement(930..1310)
                     /label=MAS promoter
                     /note="mannopine synthase promoter (Velten et al., 1984)"
     promoter        2306..2651
                     /label=CaMV 35S promoter
                     /note="strong constitutive promoter from cauliflower mosaic
                     virus"
     misc_feature    2681..2735
                     /label=TMV Omega
                     /note="translational enhancer from the tobacco mosaic virus
                     5'-leader sequence (Gallie et al., 1988)"
     CDS             2737..2739
                     /codon_start=1
                     /product="start codon"
                     /label=start codon
                     /note="ATG"
                     /translation="M"
     CDS             2740..2763
                     /label=FLAG
                     /note="FLAG(R) epitope tag, followed by an enterokinase
                     cleavage site"
     protein_bind    2767..2886
                     /label=attR1
                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
     promoter        2916..2946
                     /label=lac UV5 promoter
                     /note="E. coli lac promoter with an 'up' mutation"
     CDS             3000..3656
                     /label=CmR
                     /note="chloramphenicol acetyltransferase"
     CDS             4001..4303
                     /label=ccdB
                     /note="CcdB, a bacterial toxin that poisons DNA gyrase"
     protein_bind    complement(4347..4471)
                     /label=attR2
                     /note="recombination site for the Gateway(R) LR reaction"
     terminator      4547..5254
                     /label=OCS terminator
                     /note="octopine synthase terminator"
     misc_feature    5498..5522
                     /label=RB T-DNA repeat
                     /note="right border repeat from nopaline C58 T-DNA"
     CDS             6822..7448
                     /label=pVS1 StaA
                     /note="stability protein from the Pseudomonas plasmid pVS1
                     (Heeb et al., 2000)"
     CDS             7880..8950
                     /label=pVS1 RepA
                     /note="replication protein from the Pseudomonas plasmid
                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"
     rep_origin      9019..9213
                     /label=pVS1 oriV
                     /note="origin of replication for the Pseudomonas plasmid
                     pVS1 (Heeb et al., 2000)"
     misc_feature    9557..9697
                     /label=bom
                     /note="basis of mobility region from pBR322"
     rep_origin      complement(9883..10471)
                     /direction=LEFT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     CDS             complement(10561..11352)
                     /label=KanR
                     /note="aminoglycoside phosphotransferase"