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pMD2.G 质粒 (编号: V010404)

Note: You may want to buy the packaging plasmid psPAX2 here.

pMD2.G5822 bp60012001800240030003600420048005400AmpR promoterAmpRoribeta-globin poly(A)VSV-Gbeta-globin intronCMV promoterCMV enhancer
复制序列 NovoBuilder中查看图谱

基本信息

载体名称:
pMD2.G
载体抗性:
Ampicillin
载体长度:
5822 bp
载体类型:
Viral Expression & Packaging Vectors
复制子:
ori
载体来源:
Addgene
拷贝数:
High copy number
启动子:
CMV+intron
感受态:
DH10B
培养温度:
37℃

产品信息

质粒编号:V010404
质粒名称:pMD2.G
规格:5 μg (冻干粉)

下载资源

我们所展示的质粒图谱主要是从文献和开放数据库中收集而来，主要是为了方便研究工作，其中一小部分质粒进行了质量控制，可供科学家使用。

确保质粒的关键元件正确，但是我们并不能保证实验效果。页面展示的图谱序列为理论序列，可能与测序结果不一致，请自行比对后确定是否满足要求。(如果测过序，本页面一般会提供下载)

开放数据库中的大多数载体序列都没有被完全测序。如果实际序列与参考序列的相似度超过99%，则将其视为正确。

由于科学研究是在探索未知，具有很大的不确定性，在任何情况下，我们都不承担超出质粒本身的额外经济损失或责任。

质粒操作方法

1. 发货形式：质粒干粉(常温运输，存于-20度，请务必先转化提质粒后使用)

2. 收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl ddH2O溶解质粒;（质粒复测的浓度有时候与标称值差距较大，这可能是因为冻干质粒在管中的位置、复溶效率、测量偏差以及管壁的吸附导致，因此建议先转化提质粒后再使用）

3. 取1支100μl 感受态于冰上解冻10min，加入2μl质粒，再冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；

4. 加入900μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡37℃培养45min (30℃培养1-1.5小时);

5. 6000rpm离心5min，仅留100μl上清液重悬细菌沉淀，并涂布至目标质粒抗性的LB平板上;

6. 将平板倒置37℃培养14h，如果要求是30℃则培养20h; (菌落过多则将质粒稀释后再转化；没有菌落则加入10μl质粒转化；建议不要直接转表达感受态，要先转克隆感受态，重提质粒后再导入表达感受态);

7. 挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

参考文献

  • Mahjoor M, Afkhami H, Mollaei M, Nasr A, Shahriary S, Khorrami S. MicroRNA-30c delivered by bone marrow-mesenchymal stem cells induced apoptosis and diminished cell invasion in U-251 glioblastoma cell line. Life Sci. 2021 Aug 15;279:119643. doi: 10.1016/j.lfs.2021.119643. Epub 2021 May 25. PMID: 34048811.

  • Winiarska M, Nowis D, Firczuk M, Zagozdzon A, Gabrysiak M, Sadowski R, Barankiewicz J, Dwojak M, Golab J. Selection of an optimal promoter for gene transfer in normal B cells. Mol Med Rep. 2017 Sep;16(3):3041-3048. doi: 10.3892/mmr.2017.6974. Epub 2017 Jul 14. PMID: 28713922; PMCID: PMC5548056.

  • Abdolahi S, Khodakaram-Tafti A, Aligholi H, Ziaei S, Khaleghi Ghadiri M, Stummer W, Gorji A. Lentiviral vector-mediated transduction of adult neural stem/progenitor cells isolated from the temporal tissues of epileptic patients. Iran J Basic Med Sci. 2020 Mar;23(3):354-361. doi: 10.22038/IJBMS.2019.42285.9983. PMID: 32440322; PMCID: PMC7229514.

pMD2.G 质粒 (编号: V010404)序列

LOCUS       pMD2.G        5822 bp DNA     circular SYN 15-JUN-2024
DEFINITION  synthetic circular DNA
ACCESSION   .
VERSION     .
KEYWORDS    pMD2.G
SOURCE      synthetic DNA construct
  ORGANISM  synthetic DNA construct
REFERENCE   1  (bases 1 to 5822)
  AUTHORS   .
  TITLE     Direct Submission
FEATURES             Location/Qualifiers
     source          1..5822
                     /mol_type="other DNA"
                     /organism="synthetic DNA construct"
     promoter        59..163
                     /gene="bla"
                     /label=AmpR promoter
     CDS             164..1024
                     /codon_start=1
                     /gene="bla"
                     /product="beta-lactamase"
                     /label=AmpR
                     /note="confers resistance to ampicillin, carbenicillin, and
                     related antibiotics"
                     /translation="MSIQHFRVALIPFFAAFCLPVFAHPETLVKVKDAEDQLGARVGYI
                     ELDLNSGKILESFRPEERFPMMSTFKVLLCGAVLSRIDAGQEQLGRRIHYSQNDLVEYS
                     PVTEKHLTDGMTVRELCSAAITMSDNTAANLLLTTIGGPKELTAFLHNMGDHVTRLDRW
                     EPELNEAIPNDERDTTMPVAMATTLRKLLTGELLTLASRQQLIDWMEADKVAGPLLRSA
                     LPAGWFIADKSGAGERGSRGIIAALGPDGKPSRIVVIYTTGSQATMDERNRQIAEIGAS
                     LIKHW"
     rep_origin      1195..1783
                     /direction=RIGHT
                     /label=ori
                     /note="high-copy-number ColE1/pMB1/pBR322/pUC origin of 
                     replication"
     polyA_signal    2293..2687
                     /label=beta-globin poly(A)
                     /note="human beta-globin polyadenylation signal"
     CDS             complement(2888..4423)
                     /codon_start=1
                     /product="vesicular stomatitis virus G glycoprotein"
                     /label=VSV-G
                     /note="Indiana strain"
                     /translation="MKCLLYLAFLFIGVNCKFTIVFPHNQKGNWKNVPSNYHYCPSSSD
                     LNWHNDLIGTALQVKMPKSHKAIQADGWMCHASKWVTTCDFRWYGPKYITHSIRSFTPS
                     VEQCKESIEQTKQGTWLNPGFPPQSCGYATVTDAEAVIVQVTPHHVLVDEYTGEWVDSQ
                     FINGKCSNYICPTVHNSTTWHSDYKVKGLCDSNLISMDITFFSEDGELSSLGKEGTGFR
                     SNYFAYETGGKACKMQYCKHWGVRLPSGVWFEMADKDLFAAARFPECPEGSSISAPSQT
                     SVDVSLIQDVERILDYSLCQETWSKIRAGLPISPVDLSYLAPKNPGTGPAFTIINGTLK
                     YFETRYIRVDIAAPILSRMVGMISGTTTERELWDDWAPYEDVEIGPNGVLRTSSGYKFP
                     LYMIGHGMLDSDLHLSSKAQVFEHPHIQDAASQLPDDESLFFGDTGLSKNPIELVEGWF
                     SSWKSSIASFFFIIGLIIGLFLVLRVGIHLCIKLKHTKKRQIYTDIEMNRLGK"
     intron          4498..4973
                     /label=beta-globin intron
                     /note="internally truncated intron from human beta-globin"
     promoter        complement(5107..5310)
                     /label=CMV promoter
                     /note="human cytomegalovirus (CMV) immediate early 
                     promoter"
     enhancer        5311..5690
                     /label=CMV enhancer
                     /note="human cytomegalovirus immediate early enhancer"